CCF20121201008

-65-

13.2.3.Wykrywanie oksydazy fenolowej

Zasada: enzym ten katalizuje proces utleniania fenolu. Fenol utlenia się najpierw do pirokatcholu, a następnie do chinonu, który daje pochodne o barwie brązowej.

fenol    pirokatechina    o-benzochinon

Wykonanie oznaczenia:

Odczynniki: sok - miąższ ziemniaczany 1% roztwór fenolu

Na tarce jarzynowej utrzeć kawałek ziemniaka i trochę miąższu umieścić w probówce, a następnie dodać 10 kropli 1% roztworu fenolu. Po pewnym czasie miąższ ziemniaka przyjmuje zabarwienie brązowe, które z czasem nasila się.

13.2.4. Wykrywanie oksydazy połifenolowei

Zasada: oksydaza polifenolowa katalizuje utlenianie wielofenoli do barwnych chinonów, które dalej kondensują na pochodne, zabarwione żółto lub brązowo. Z pirogallolu powstaje żółta purpurogallina. Enzym ten jest metaloproteidem zawierającym Cu⁺²'. Występuje w wielu warzywach i owocach.

OH

OH

pirogallol

O OH

OH

purpurogallina

Wykonanie oznaczenia

Odczynniki: sok, lub miąższ ziemniaczany 1% roztwór pirogallolu

Utarty na tarce miąższ ziemniaka przenieść do probówki, a następnie dodać 10 kropli pirogallolu. W wyniku reakcji powstaje żółte zabarwienie.

III. Hydrolazy

Hydrolazy są enzymami, które katalizują rozszczepienie substratu przy udziale cząsteczek wody, w wyniku czego z substratu powstają dwa produkty o mniejszej masie cząsteczkowej.

13.2.5.Rozkład mocznika pod wpływem ureazy.

Zasada: ureaza rozkłada mocznik na dwutlenek węgla i amoniak. Optimum działania enzymu to pH 7,8 - 7,9. W wodnym roztworze C0₂ i NH₃ ulegają kondensacji z utworzeniem węglanu amonowego. Na skutek tej reakcji odczyn reakcji jest zasadowy:

(NH₄)₂C0₃ + h₂o

ip +    H₂0 -^C0₂ + 2NH₃

nh₂

Wykonanie oznaczenia:

Odczynniki: mocznik uraza

fenoloftaleina

Do probówki wlać 1 ml mocznika ,a następnie dodać 1 ml roztworu urazy oraz 2 krople fenoloftale-iny. Bezbarwny początkowo roztwór czerwienieje po paru minutach.