CCF20121201009

-66-

13.2.6. Hydroliza sacharozy przez inwertazę

Zasada: Inwertaza należy do glikozydaz (podklasa hydrolaz). Enzym ten katalizuje reakcję hydrolizy wiązania pomiędzy a-D-glukopiranozą i P-D-fruktofuranozą w sacharozie, która jest nieredukującym dlsacharydem. . Enzym ten występuje w drożdżach.

Wykonanie oznaczenia:

Odczynniki: świeże drożdże

1% roztwór sacharozy Fehling I i II

Grudkę drożdży rozdrobnić w około 5 ml wody, a uzyskaną zawiesinę drożdży rozdzielić do trzech probówek (1,2,3)

Probówka -1	Probówka - 2	Probówka - 3
lml zawiesiny drożdży	lml zawiesiny drożdży	lml zawiesiny drożdży
2 ml sacharozy	2 ml wody	zagotować nad palnikiem
Łaźnia wodna 2 minuty	Odstawić do statywu	2 ml sacharozy; odstawić
Reakcja Fehlinga* Reakcja dodatnia	Reakcja Fehlinga Reakcja ujemna	Reakcja Fehlinga Reakcja ujemna

•Reakcja Fehlinga: do probówki wlać 1 ml Fehlinga I i lml Fehlinga II oraz 1 ml z zawartość probówki -1, powtórzyć tę samą czynność z probówkami 2 i 3 . Następnie probówki umieścić we wrzącej łaźni wodnej na 5 minut. O obecności cukrów redukujących świadczy pomarańczowo ceglasty osad. Jest to dodatni wynik reakcji Fehlinga.

Reakcja i zabarwienie pierwszej probówki (1) wskazuje na obecność enzymu inwertazy w drożdżach ponieważ nastąpiła hydroliza sacharozy na cukry proste posiadające własności redukujące. W probówce drugiej (2) wykazano ,że sam roztwór drożdży nie zawiera substancji redukujących .Reakcja w probówce trzeciej (3) wykazała że drożdże posiadają zdolność hydrolizy sacharozy, lecz enzymy biorące udział w tej reakcji są nieczynne pod wpływem wysokiej temperatury.

13.2.7. Ilościowe oznaczanie aktywności amylazy śliny metodą Wolghemuta Zasada: amylaza śliny to enzym zaliczany do hydrolaz (podklasa glikozydazy) jest aktywowana jonami chlorkowymi. Katalizuje hydrolizę wiązań glikozydowych typu a-l,4 wewnątrz cząsteczek łańcucha polisacharydowego skrobi.

Wyróżniamy: a i P- amylazy

a-amylaza (endoamylaza dekstrynotwórcza) hydrolizuje cząsteczkę skrobi od środka łańcucha, rozrywając wiązania a-l-4-glikozydowe z pominięciem a-1-6 glikozydowych. Powstają wówczas ni-sko-

cząsteczkowe dekstryny oraz a-maltoza, nie dająca zabarwienia z jodem

P-amylaza (egzoamylaza dekstyrnotwórcza) hydrolizuje co drugie wiązanie a-1-4 glikozydowe, począwszy od końca nie aldehydowego, w wyniku czego następuje hydroliza łańcucha skrobi i powstaje P-maltoza i wysoko-cząsteczkowe dekstryny dające zabarwienie z jodem Oprócz śliny amylaza występuje również w trzustce.

Za jednostkę wzorcową aktywności amylazy przyjmuje się w metodzie Wolghemuta

taką ilość enzymu, które w czasie 30 minut rozkłada do stadium achrodekstryn (nie dających

zabarwienia z jodem) 1 mg skrobi

Wynik podaje się w ml 1% skrobi rozłożonej w czasie 30 minut przez 1 ml śliny