SNC02086

▼

i

o

2)

3)

4)

5)

6)

Odczynniki: roztwór wzorcowy odczynnik A: 2% r

Oznaczanie białka metodą Limy'ego

białka: 20 mg albuminy wołowej w 100 ml wody oztwór NajCOj w 1.0 M NaOH odczynnik Bi: 1% roztwór CuSO< odczynnik Bj:2% roztwór winianu sodowo- potasowego odczynnik C: 0,5 ml odczynnika Bi, 0,5 ml odczynnika B2 oraz 50 ml odczynnika A odczynnik fenolowy Folina- Ciocalteu

Wykonanie oznaczenia.

Do roztworu białka dodaje się odczynnik C, dokładnie miesza zawartość probówki i pozostawia w temperaturze pokojowej na 10 minut. Następnie dodaje się mieszając odczynnik Folina- Ciocalteu rozcieńczony dwukrotnie wodą. Po upływie 30 minut odczytuje stę absorbancję przy długości fali 650 nm wobec próby kontrolnej nie zawierającej roztworu biłka.

Nr probówki	Stężenie białka (pg/ml)	Absorbancja
1	20	0,035
2	60	0,155
3	140	0,375
1 4	180	0,450

Oznaczenie inwertazy .

a)    wolny enzym:

Absorbancja jest równa 0,083 co odpowiada stężeniu białka 31,92 pg/ml

31,92 |ig/ml * 1000 = 31920 pg/ml

31920 pg/ml * 0,05 = 1596 pg/ml

1596 pg/ml * 100 = 159600pg/g = 159,6 mg/g

b)    białko w przesączu I:

Absorbancja wynosi 0,01 co odpowiada stężeniu białka 3,8 pg/ml.

3,8 pg/ml * 16ml = 61,54 pg

61,54 pg* 10 = 615,4 pg/g = 0,615 mg/g

c)    białko w przesączu II:

Absorbancja wynosi 0,0 co oznacza brak białka.

Białko związane = Białko dodane - Białko w przesączach = 159,6 mg/g - 0,615 mg/g = = 158,98 mg/g

Wydajność teoretyczna = (Białko związane / Białko dodane) * 100 % =

= 158,98 mg/g /159,6 mg/g * 100 % = 99,61 %