20080505076

2) Sprawdzić, jakie miejsca rozpoznają enzymy restrykcyjne Sspl i Mbol w intcmecie.

Dzień II

3) Elektroforeza w żelu agarozowym.

a.

b.

c.

d.

c.

Przygotować 1% żel agarozowym agarozowym buforzeTAE (lx stęż). Przygotować próbki do nałożenia na żel: po 10 pl produktu PCR i 2.5 pl buforu obciążającego.

Nałożyć tak przygotowane próbki na żel.

Prowadzić elektroforezę przy 90 V przez 30 minut.

Żel barwić w bromku ctydyny przez 10 minut.

/C v - 16 U A* - *

4) Przygotować reakcję mctyiacji.

Bufor reakcyjny dam methylasc S-adcnozylometionina Mctylaza dam Produkt PCR - 15 pl Woda - uzupełnić do 20 pl

Inkubacja w 37°C przez 1 h. Inaktywacja w 65°C przez 15 minut.

teco

1

- u

Stężenie wyjściowe 10x

3.2mM

8000U/mI

Stężenie końcowe lX

80 pM 2U/r

O

ni

5) Przygotować reakcje trawienia produktu PCR enzymami restrykcyjnymi:

a) Sspl

Stężenie wyjściowe    Stężenie końcowe

Bufor G    10x    1^x

Sspl    lU/pl    2U/r

Produkt PCR - 10 pl Woda —uzupełnić do 15 pl

Stężenie końcowe 1 x

2U/r

Stężenie końcowe 1 x

2U/r

2U/r

b) Mbol

Stężenie wyjściowe Bufor R    i 0x

Mbol    lU/pl

Produkt PCR - 10 pl Woda - uzupełnić do 15 pl

c) Sspl + Mbol

Stężenie wyjściowe

Bufor Tango ™    10x

Sspl    lU/pl

Mbol    lU/pl

Produkt PCR - 10 pl Woda - uzupełnić do 15 pl

Inkubacja w 37°C przez 2 h.

12