20080526088

•    10 ul roztworu zawierającego plazmid pMuoroGreen™

•    10 pl roztworu zawierającego plazmid pł luoroBlue™

•    po 5 pl pFluoroGrccn™ i pFluoroBlue™

Uwaga: Plazmidy DNA należy dodać bezpośrednio do zawiesiny komórek.

16)    Inkubować probówki na lodzie przez 15 minut.

17)    Przenieść probówki do temp. 42°C i inkubować przez 90 s.

18)    Ponownie (bardzo szybko) umieścić probówki na lodzie i inkubować przez 2 minuty.

19)    Używając sterylnej pipety, dodać do każdej probówki 250 pl pożywki Luria Recovcry Broth i wymieszać.

20)    Inkubować komórki przez 30 minut w temp. 37°C.

21)    Podpisać płytki z agarem: LB-, LB+, LB/Amp+ i LB/Amp- (minus oznacza brak

plazmidu, plus obecność plazmidu DNA).

22)    Po inkubacji wyjąć z łaźni wodnej i umieścić je w statywie.

23)    Używając sterylnej pipety 1 ml, przenieść po 0.2 ml roztworu komórek z probówki oznaczonej ..-DNA” na środek płytek z agarem, opisanych LB- i LB/Amp-.

24) Ezą rozprowadzić komórki po całej powierzchni płytek.

25)    Przykryć płytki i czekać aż płyn zostanie zaabsorbowany przez podłoże agarowe.

26)    Używając sterylnej pipety 1 ml, przenieść po 0.2 ml roztworu komórek z probówki oznaczonej ,,+DNA" na środek płytek z agarem, opisanych LB+ i LB/Amp+.

27)    Ezą rozprowadzić komórki po całej powierzchni płytek.

28)    Przykryć płytki i czekać az płyn zostanie zaabsorbowany przez podłoże agarowe.

29)    Podobnie oznaczone płytki zestawić jedna na drugą, stroną z agarem do góry, skleić boki

płytek plastrem.

30)    Płytki w odwróconej pozycji inkubować w 37°C przez całą noc (15 - 20 godzin).

Doświadczenie 2

1) Przygotować medium LB (30 ml)

•    0,3 g Bactotrypton

•    0,15 g Bactoyeast Extract

•    0,15 g NaCl

•    w'oda do 30 ml

•    Dostosować pH do 7 za pomocą NaOH