CCF20090317000

r

Ćwiczenie nr 10

Oznaczenie ryboflawiny w mleku

-) H^Au<?C+ Lyo^Yi KAę

gctetyy

’) 1k7t$icwć -) UctfKtć

~) UWM OCWkH ■+ jtdbHMluMim

F^/bu +tfi<9_z

k‘c

Gf&TU/kOę

/\-w ‘

Do kolbki stożkowej o pojemności 250 cm^J wlać pipetą 50.0 cm^J odtłuszczonego mleka i dodać powoli bez wstrząsania 50 cm³ (używając cylindra miarowego) bezwodnego alkoholu metylowego. Całość ogrzewać na łaźni wodnej w temperaturze 60 ⁰ C przez 15 minut. Po oziębieniu dodać 0,1 cm^J lodowatego kwasu octowego i 10 cm^J bezwodnego metanolu. Po zamknięciu korkiem zawartość kolby stożkowej wstrząsnąć energicznie i zostawić na 30 minut do opadnięcia osadu, a następnie przesączyć do kolby okrągłodennej o pojemności 250 cm³. Dla przyspieszenia sączenia należy najpierw przez sączek zlać klarowną, a następnie resztę cieczy wraz z osadem. Osad na sączku przemyć trzykrotnie porcjami po 10 cm^J 75 % metanolu. Zebrane przesącze zagęścić w temperaturze 60 °C do objętości około 15 cnT. W tym celu należy użyć łaźni wodnej z regulacją temperatury oraz wyparki rotacyjnej.

Łaźnię wodną należy włączyć pół godziny przed rozpoczęciem zagęszczania Po nagrzaniu łaźni należy;

-kolbę okrągłodenną z przesączem zamontować na wyparce -wyregulować przepływ wody przez chłodnicę wyparki -pokrętło regulatora obrotów ustawić w pozycji „5”

-zanurzyć obracającą się kolbę w łaźni wodnej -otworzyć kurek doprowadzający powietrze na końcu chłodnicy -połączyć wężem gumowym wyparkę z pompą próżniową -stopniowo i ostrożnie zamykać korek na chłodnicy Uwaga

Zagęszczany roztwór, szczególnie na samym początku silnie się pieni, co powoduje często przerzucenie części roztworu do odbiralnika wyparki, powodując straty. Aby temu zapobiec próżnię należy zwiększać stopniowo przez ostrożne zamykanie kurka na chłodnicy przy jednoczesnym obserwowaniu zagęszczonej cieczy. Jeżeli roztwór zaczyna się intensywnie pienić, należy otworzyć kurek. Spowoduje to dopływ powietrza zmniejszenie próżni i zanik piany. Po zaniku piany ponownie ostrożnie zamykać kurek i obserwować zachowanie cieczy.

Podgęszczony roztwór przenieść ilościowo do kolby miarowej o pojemności 25 cm\

nadmanganianu potasu.

-i

dodać 0,5 cm^J lodowatego kwasu octowego oraz 1 cm 4 %

Roztwór wymieszać, po upływie 1 minuty doda 1 cm"' 3% rozt\