DSC00217(1)

Laboratorium?

WITAMINY

Ćwiczenie 1: Kolorymetryczne oznaczanie stężenia witaminy C a) Przygotowanie krzywej wzorcowej

Ze standardowego roztworu kwasu askorbinowego (100 pg/mL) przygotuj (używając wody destylowanej jako rozpuszczalnika) roztwory o objętości końcowej v = 2 mL, zawierające kwas askorbinowy o stężeniach: 5, 10, 20, 30, 40 i 50 pg/mL. Do każdej probówki dodaj po 0,2 mL odczynnika Folina. Przygotuj próbę zerową (ślepą) zawierającą 2 mL wody destylowanej i 0,2 mL odczynnika Folina. Wszystkie probówki energicznie wymieszaj.

Po 10 minutach zmierz absorbancję prób badanych wobec próby ślepej na spektrofotometrze przy długości fali A = 700 nm.

Korzystając z uzyskanych wyników przygotuj na papierze milimetrowym wykres zależności absorbancji (oś Y) od stężenia kwasu askorbinowego (oś X) oraz oblicz współczynnik kalibracji K.

b) Oznaczanie stężenia witaminy C w materiale biologicznym Do probówek wirówkowych zawierających po 1 mL surowicy krwi lub soku z cytryny, ziemniaka i in. dodaj po 2 mL 10% roztworu TCA (kwas trójchlorooctowy), próby energicznie wymieszaj i wstaw na 5 minut do pojemnika z lodem. Wytrącony osad odwiruj (3000 obrotów / min. przez 10 min.).