DSC245

Metody spektrofotometryczne w badaniu właściwości przeciwutleniających żywności Oznaczenie aktywności przeciwutleniającej metodą redukcji rodnika DPPH Zasada metody:

Właściwości przeciwrodnikowe badanych naparów należy oznaczyć testem z zastosowaniem rodnika DPPH (2,2-difenylo-l-pikrylhydrazyl). Metoda ta pozwala na określenie stopnia wygaszania rodnika DPPH w określonym czasie, zainicjowanego w obecności przeciwutleniacza. Rodnik 2,2-difenylo*l*pikrylhydrazylowy jest stabilny, wykazuje maksimum absorpcji przy długości fali X = 515 nm. W obecności przeciwutleniacza ulega on redukcji, którą charakteryzuje zmiana barwy alkoholowego roztworu DPPH^- z fioletowej na żółtą. Im silniejsze są właściwości przeciwutleniające danej próbki, tym zmniejszenie absorbancji odzwierciedlające redukcję rodnika DPPH jest większe. Próbki o mniejszej zdolności dezaktywacji wolnego rodnika wykazują niewielki spadek absorbancji.

Odczynniki chemiczne:

-    DPPH (2£-difenylo-l-pikrylhydrazyl; alkoholowy roztwór).

Do fiolki pojemności 20 cm³) pobrać 9 cm³ metanolu następnie dodać 3 cm³ przygotowanegp M roztworu DPPH.

-    Metanol (alkohol metylowy).

Przygotowanie naparów herbat:

Zalać 1 g badanego materiału 100 cm³ wody destylowanej (temp. 90°C). Po upływie 8 min przesączyć napar przez sączek i schłodzić do temp. pokojowej.

Wykonanie oznaczenia:

A0 - 2 cm³ metanolu i 1,5 cm³ przygotowanego roztworu DPPH.

A - próba badana - 2 cm³ badanego naparu i 1,5 cm³ przygotowanego roztworu DPPH. Pomiar absorbancji wykonać przy długości fali X=515 nm po 30 min od zainicjowania reakcji. Pomiar wykonać w dwóch powtórzeniach.

Kalibracja - kalibrację spektrofotometru przeprowadzić używając metanu/.!