mikrobiologia
2

BEZTLENOWCE

Warunkiem niezbędnym dla wzrostu bakterii beztlenowych jest eliminacja tlenu ze środowiska wzrostowego

Metody hodowli drobnoustrojów beztlenowych dzieli się na :

Biologiczne - oparte na wspólnej hodowli drobnoustrojów beztlenowych z tlenowymi Fizyczne - polegające na mechanicznym usunięciu powietrza lub absorbcji tlenu Chemiczne - wykorzystuje się substancje redukujące tlen ze środowiska hodowli Mieszane

Metoda biologiczna Fortnera

Metoda ta polega na wspólnej hodowli drobnoustrojów tlenowych (np.Bacillus subtilis, cereus) z beztlenowcami

Na płytce w zastygłej pożywce wycina się pasek oddzielający dwa pola płytki. Na jednym z nich wysiewa się (na murawę) drobnoustrój zużywający tlen w czasie wzrostu a na drugim beztlenowy. Płytki uszczelnia się plasteliną i inkubuje. W pierwszej kolejności, korzystając z obecności tlenu wyrośnie drobnoustrój tlenowy, który wykorzystując tlen, stworzy warunki odpowiednie do wzrostu beztlenowca.

Metody fizycznel. Usunięcie powietrza pompą próżniową i hodowli w anaerostacie lub eksykatorze próżniowym. Po usunięciu powietrza może być wprowadzony gaz obojętny;

2.    Ogrzanie pożywki i szybkie schłodzenie przed posiewem (regeneracja podłoża). Powoduje to obniżenie Eh z 0,1 do 0,03 V;

3.    Nawarstwienie zregenerowanego podłoża warstwą parafiny lub korkiem agarowym. Adsorpcję tlenu z podłoży płynnych przez dodatek tkanki roślinnej (ziemniaki, marchew) lub zwierzęcej (wątroba, serce) a następnie pokrycie powierzchni pożywki warstwą parafiny, wazeliny, agaru wodnego;

5. Hodowla beztlenowców na wysokim słupku pożywki agarowej.

Metody chemiczne

Metody chemiczne polegają na wiązaniu tlenu przez substancje redukujące, łatwo utlenialne. Substancje te mogą być dodane do pożywki lub też umieszczone poza nią.

Związki redukujące dodawane do pożywek:

-    0,5-1% roztwór glukozy,

-    0,1% roztwór Na2SC>3,

-    substancje biologicznie czynne ( cysteina, glutation, kwas askorbinowy tioglikolan sodowy). Związki redukujące dodawane poza podłożem np:

-pirogallol (C₆H₃(OH)₃ ),

-    tiosiarczan sodu fNaoS?Ch).Gotowe zestawy eliminujące tlen ze środowiska wzrostowego: np. Gas-Pak firmy bioMerieux, AnaeroGen firmy Oxoid.

Metody mieszaneStanowią one połączenie kilku metod. Przykładem takiej metody jest posiew na podłoże Wrzoska. Jest to pożywka płynna, w której tlen zawarty w podłożu jest absorbowany przez kawałki wątroby, pożywka oddzielona jest od tlenu atmosferycznego warstwą płynnej jałowej parafiny.

Przed posiewem podłoże należy zregenerować przez gotowanie.