Obrazek 0004

12

I

I

C

H

N

ĆWICZENIE 2

TEMAT: STERYLIZACJA W AUTOKLAWIE I APARACIE KOCHA

Cel: Porównanie skuteczności jednorazowej obróbki termicznej w parze bieżącej i w parze nasyconej pod ciśnieniem

Autoklaw (sterylizator parowy) jest urządzeniem ciśnieniowym.

w którym wytwarzana para wodna sprężana jest do wartości 0,08 - 0,3 MPa (0,8 - 3 atm.) przez co uzyskuje ona temperatury 117- 138°C.

Istnieją różnego typu autoklawy. Na przykład autoklawy stosowane w medycynie wyposażone są w urządzenia suszące pozwalające na suszenie wysterylizowanej bielizny czy materiałów opatrunkowych. Autoklawy stosowane w przemyśle spożywczym zaopatrzone są w obrotowe pojemniki na puszki. Rys.1 przedstawia schemat autoklawu stosowanego w laboratorium mikrobiologicznym.

W autoklawach wyjaławiamy:

•    pożywki bakteriologiczne, zestawy zawierające elementy o różnej rozsżerzalności cieplnej - tzw. sterylizacja czysta

•    wykorzystane pożywki bakteriologiczne, próbki do badania bakteriologicznego (w medycynie i weterynarii) - tzw. sterylizacja brudna

Najczęściej stosowane parametry sterylizacji w autoklawach:

■    117°C/0,08 MPa - 30 min.: IŻI^C/O.I MPa - 15 min (sterylizacja czysta)

*    132°C/0.25 MPa - 30 min (sterylizacja brudna)

Uwarunkowania bezpiecznej i prawidłowej pracy autoklawu parowego:

• do użycia może być dopuszczone urządzenie mające ważny atest Rejonowego Dozoru Technicznego « autoklaw musi być sprawny

■ autoklaw może obsługiwać wyłącznie osoba przeszkolona « autoklaw należy obsługiwać zgodnie z instrukcją obsługi

Zasady sterylizacji w autoklawie:

■    uzupełnić wodę w płaszczu wodnym

■    włożyć do komory autoklawu sterylizowany materiał • zamknąć pokrywę

■    włączyć grzanie

■    po osiągnięciu temperatury 100°C odpowietrzyć autoklaw

Mieszanina powietrza i pary wodnej nie działa tak skutecznie jak sama para wodna.

• prowadzić sterylizację przez określony czas

■ po sterylizacji umożliwić spadek ciśnienia w autoklawie do zera i otworzyć autoklaw

W żadnym razie nie próbować otwierać autoklawu przed spadkiem ciśnienia do 0 Wystygnięcie zamkniętego autoklawu może utrudnić otwarcie pokrywy wskutek jej zassania - wytworzonego podciśnienia'

Materiały:

1.    Probówka z 5 ml 7-dniowei hodowli bulionowej szczepu wytwarzającego fermy przetrwalne - oznakowana literą A

2.    Probówka z 5 ml 7-dniowej hodowli bulionowej szczepu nie wytwarzającego form przetrwalnych - oznakowana literą B

3.    Statyw z sześcioma probówkami zawierającymi po 5 ml, jałowego bulionu odżywczego każda

4.    Dwie jałowe pipety - 1 ml

5.    Dermatograf

Wykonanie:

1.    Probówki zawierające jałowy bulion odżywczy oznaczyć numerami od 1 do 6 oraz numerem stanowiska i grupy

2.    Do probówek oznaczonych numerami od 1 do 3 przenieść po 0.5 ml materiału z probówki oznaczonej literą A

3.    Do probówek oznaczonych numerami od 4 do 6 przenieść po 0.5 ml materiału z probówki oznaczonej literą B

4.    Probówki oznakowane 1A i 4B oraz 2A i 5B poddać działaniu odpowiedniego

j    czynnika termicznego (patrz: Tabela 3)

j    5. Probówki oznakowane numerami 3A i 6B pozostawić w statywie

I    6. Poddane obróbce termicznej probówki oznakowane 1A, 4B, 2A, 5B ustawić w

i    statywie obok probówek z oznakowaniem 3A i 6B; całość inkubować w 37°C/24h

7.    Dokonać odczytu wyników i zapisać je w Tabeli A 3 przyjmując następującą zasadę i ❖ brak wzrostu (klarowne podłoże) = (-)

❖ wzrost (widoczne zmętnienie całego podłoża lub wzrost w formie kożuszka na ■i    powierzchni podłoża) = (+)

8.    Dokonać oceny skuteczności porównywanych metod obróbki termicznej.

]    9. Wyniki oceny zapisać w Tabeli 4 , wg schematu:

♦> wzrost na podłożu po inkubacji = brak skuteczności procesu = (-) brak wzrostu na podłożu po inkubacji = proces skuteczny = ( + )