PC161332

ZADANIA

I. Napędowa siła hydrolizy. Wiele reakcji biosyntezy, takich jak na przykład synteza DNA, przebiega kosztem reakcji hydrolizy pirofosforanu do ortofosforanów. U E. coli tę hydrolityczną reakcję katalizuje euzyni pirofosfataza, który zbudowany jest z sześciu identycznych podjednostek i którego całkowita masa wynosi 120 kDa. Jednostka aktywności tego enzymu odpowiada takiej jego ilości, która hydrolizuje 10 mikromoLi pirofosforanu w ciągu 15 min w temperaturze 37°C, w warunkach standardowych. Oczyszczony, enzym wykazuje V_amx równą 2800 jednostek ha mili^rafn białka enzymatycznego.

a.    Ile moli substraui ulega hydrolizie w ciągu jednej sekundy z udziałem 1 mg enzymu, gdy stężenie subsiratu jest znacznie większe niż jf_M?

b.    Ile moli miejsc aktywnych znajduje się w 1 mg enzymu? Zakładamy, że jedna podjednostka odpowiada jednemu miejscu aktywnemu.

c.    Jaka jest liczba obrotów tego enzymu? Należy porównać tę wartość z innymi, wymienionymi w tym rozdziale.

2. Zniszczenie konia trojańskiego. Penicylina ulega hydrolizie, a tym samym unieczynnieniu, przez penicylinazę (znaną też jako /i-laktamaza), enzym występujący u niektórych opornych bakterii. Masa częsteczkowa tego enzymu u Staphylococcus aureus wynosi 29,6 kDa. Dokonano pomiaru ilości penicyliny hydrolizowanej w czasie 1 min w 10 ml roztworu, zawierającego 10 ⁹ g oczyszczonej penicylinazy, dla różnych stężeń penicyliny. Zakładamy, że podczas pomiaru stężenie penicyliny zmienia się tylko nieznacznie.

(Penicylina]	Ilość hydrolizowana (nanomole)
1	0,11
3	0,25
5	0,34
10	0,45
30	0,58
50	0,61

a.    Korzystając z podanych wartości, wykreśl zależność \IV od 1/[S]. Czy penicylinaza stosuje się do kinetyki Michaeli-sa-Menten? Jeżeli tak, jaka jest jej wartość jf_M?

b.    Jaka jest wartość V_mJ!

c.    flę wynosi liczba obrotów penicylinazy w warunkach przeprowadzonego doświadczenia? Zakładamy, że na cząsteczce enzymu istnieje jedno miejsce aktywne.