(7)

Sączenie molekularne nn żelu Scphadex

Zasada:

Sephadex jesi pochodną dekstranu - wielkocząsteczkowego polimeru, w którym reszty a-glukozy są powiązane wiązaniami ct-i,6-glikozydowymi i usieciowane wiązaniami a-1.3 i a-!,4. Obecność hydrofitowych grap wodorotlenowych w cząsteczkach Sepha-dexu powoduje, że żele te łatwo chłoną wodę. Pod wpływem epichlorohydryny częściowo zhydrolizowany dekstran tworzy struktury trójwymiarowe. Liczba mostków między łańcuchami dekstranu określa stopień usieciowania żelu oraz jego zdolność rozdzielczą. Poszczególne typy żeli oznaczane symbolami GłO do G200 różnią się stopniem usieciowania i co za tym idzie zdolnością pęcznienia.

Wykonanie.

Kolumnę o średnicy ok. I cm napełnić do wys. 40 cm żelem Scphadex G75 napęczniałym uprzednio w wodzie (Ig suchej masy wiąże 7,5g H2O tworząc 12-15 ml żelu). Kolumnę przemyć ok. 100 ml wódy destylowanej i odciągnąć wodę znad powierzchni żelu. Następnie na powierzchnię żelu wprowadzić lml roztworu zawierającego błękit dekstranowy (masa molowa ok. 2000 kD) i K^CryOy (masa molowa 294 D). Otworzyć wypływ kolumny i po wsiąknięciu w żel naniesionej próbki zmyć ściany kolumny niewidką ilością wody destylowanej, a następnie prowadzić eiucję wodą z szybkością ok.

I ml zbierając frakcje ok. 2 ml aż do całkowitego wycluowania obu składników. Wykreślić widma absorpcyjne obu rodzaju frakcji.

Sprzęt

Kolumna chromatograficzna 4- ok. 1 cm, 1 ok. 50 cm

Odczynniki-"

/ . Scphadcs G-75. roztwór błękitu dekstranowego 2000 kD 4 mg/mi, roztwór K2O2O7 7. mg/ml ^N;