img284

80 Dorota Hoja-Łukowicz

Literatura

Bradford M.M.: A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing theprinciple of protein-dye binding, Anal. Biochem. 72 (1976), s. 248-254.

Lowry O.H., Rosebrough N.J., Fair A.L.and Randall F.J.: Protein measurement with the Folin phenol reagent, J. Biol. Chem. 193 (1951), s. 265-275.

Whitaker J.R. and Granum P.R.: An absolute method for protein determination based on difference in absorbance at 235 and 280 nm, Anal. Biochem. 109 (1980), s. 156-159.

Witwicki L: Ogólna charakterystyka enzymów [w:] Elementy enzymologii (red. J. Witwicki, A. Ardel-ta), PWN, Warszawa 1989, s. 38-39.

ZASTOSOWANIE CHROMATOGRAFII POWINOWACTWA IMMUNOLOGICZNEGO DO OCZYSZCZANIA ENZYMÓW

Pracownia Badań Biostrukturalnych Zakładu Fizjologii Zwierząt UJ

Wstęp

Chromatografia obok elektroforezy preparatywnej i preparatywnego ogniskowania izoeiek-trycznego jest metodą rozdzielania złożonych mieszanin różnorodnych związków chemicznych. Wśród metod chromatograficznych wyróżnia się thromatografięi.:cieczową-i»-gązową# Chromatografią cieczow.ą’dzieli się na: ądsorpcyjny podziałowy, sitową, jonpwymienną i afi-nitywną (powinowactwa). Natomiast/^^^S^^^^^pśFdzieli się na adsorpcyjną i£0; dziąłgw^ Techniki chrom^tojraficzne z kolei dzieli się na: kolumnową, bibułową, cienkowarstwową, gazową wysokociśnieniową kolumnową i sitową.

Chromatografia powinowactwa jest chromatografią adsorpcyjną kolumnową, gdzie substancja oczyszczana jest specyficznie i odwracalnie adsorbowana przez komplementarnie wiążącą substancję (ligand) przyłączoną do nierozpuszczalnego podłoża. Izolowana substancja oczyszczana jest kilka tysięcy razy w jednym etapie i odzyskiwana w formie aktywnej z dużą wydajnością. Poniższy schemat obrazuje zasadę oczyszczania określonej substancji metodą chromatografii powinowactwa.

O

ligand

⁺ 1 * izolowana cząsteczka

>    —-

przyłączenie Uganda do podłoża

-►

adsorpcja

_l_ substancje balastowe

desorpcja