Scan90004

I. Właściwości barwników fotosyntetycznych

W celu poznania właściwości barwników fotosyntetycznych obecnych w liściach należy rozdzielić je metodą chromatografii cienkowarstwowej, a następnie wykreślić ich widma absorpcji.

Wykonanie

1. Przygotowanie ekstraktu barwników'

Rozdrobnione liście pszenicy (ok. 5g) przenieść do moździerza, dodać ok. 20 ml acetonu, szczyptę CaCCb i dobrze rozetrzeć. Otrzymaną masę przesączyć przez niewielką ilość waty umieszczonej w lejku (ewentualnie przemyć kilkoma ml acetonu). Przesącz przenieść do rozdzielacza, dodać 2 ml benzyny, 5 ml HfO destylowanej, a następnie delikatnie wymieszać.

Po kilku minutach utworzą się dwie warstwy. Dolną warstwę (jasnozieloną) należy zlać do zlewki. Górną warstwę benzynową (ciemnozieloną) należy rozdzielić chromatograficznie.

2. Rozdział barwników' metodą chromatografii cienkow arstwowej

Benzynowy ekstrakt nanosimy kropelkami na płytkę powleczoną żelem krzemionkowym (Kieselgel G) (ok. 3cm od dolnego brzegu płytki oraz ok. 1 cm od boków płytki), tak aby uzyskać ciemnozielone w^rąskie pasmo.

Uwaga! Pipeta do nanoszenia powinna być sucha.

Płytkę z naniesionym przesączem barwników wstawiamy do kamery zawierającej rozwijacz: benzyna-izopropanol-w'oda w stosunku 100:10:0.25. Rozwijacz powinien zwilżać żel na płytce do wysokości ok. 1 cm od dna kamery a nie naniesione pasmo barwników. Kamerę szczelnie przykrywamy. Rozwijacz podsiąkając do góry pociąga za sobą poszczególne barwniki w kolejności zależnej od ich stopnia polarności. Rozdział kończymy, gdy pojawią się wyraźnie rozdzielone poszczególne pasma barwników, jak pokazano na rysunku.