PTDC0002 (3)

PTDC0002 (3)



Ćwiczenie Z

Opracował Piotr Szweda

Do katalizowania hydrolizy białek często używa się alkalazę, której substancją aktywną jest subtylizyna A (endopeptydaza serynowa), wytwarzana przez bakterie Bacillus licheniformis. Enzym ten hydrolizuje wiązania peptydowe wewnątrz cząsteczki białka i nie przejawia aktywności względem wiązań na N- i C-końcu łańcucha peptydowego. Alkalaza jest enzymem o małej specyficzności, rozszczepiającym wiązania peptydowe pomiędzy resztami różnych aminokwasów. Preparat ten wykazuje największą aktywność w temperaturze 55-60 °C przy pH 8,5. Oporność cieplna wymienionego enzymu maleje w kwaśnym środowisku i przy pH < 4 ulega on inaktywacji już po 30 min ogrzewania w 50 °C, natomiast przy pH < 3 utrata aktywności następuje nawet bez ogrzewania.

W przypadku alkalazy szybką kontrolę stopnia hydrolizy można przeprowadzić rejestrując zmiany kwasowości wywołane (opis do metody pił -stat) rozszczepieniem wiązań pcptydowych. Po ich rozpadzie zachodzi wymiana protonu:

- CHR-COOH + H2N-CHR CHR-COO' + +H3N-CHR

Stopień hydrolizy oblicza się za pomocą wzoru Olsena (1985), na podstawie ilości roztworu NaOH zużywanego do zobojętniania grup -NH3+ podczas utrzymywania stałego pH procesu.

RCH-NH3+ + OH' -> RCH-NH2 + h2o

Stosowanie tego sposobu kontroli stopnia hydrolizy nie jest możliwe w przypadku enzymów działających W kwaśnym Środowisku W którym niewiele grup aminowych ma ładunek elektryczny (mała wartość a).

Celem ćwiczenia jest wyznaczenie zmian stopnia hydrolizy białek w czasie reakcji katalizowanej alkalaza. Każda z grup bada działanie enzymu na białka obecne w innym surowcu lub produkcie żywnościowym.

DoŚW. 1. Enzymatyczna hydroliza białek mięsa i oznaczanie UH metodą nH-Stat

•    Do 150 g zmielonego mięsa wołowego, drobiu lub ryby dodać 300 ml wody destylowanej. (Mięso wcześniej zmielić).

•    Wprowadzić do zlewki elektrodę pH-metru, ogrzać mieszaninę do 55 °C w łaźni wodnej (wcześniej wlewacie do łaźni przegotowaną ostudzoną wodę destylowaną,) i doprowadzić pił do 8,5, stosując 4 M roztwór NaOH i mieszając zawartość zlewki mieszadłem mechanicznym. Objętość roztworu NaOII zużytego do wstępnej regulacji pi I należy zanotować.

•    Do prób dodać 1 ml lub 4 ml alkalazy o aktywności 2.4L i natychmiast rozpocząć pomiary pH wykonywane co 5 min (zegary).

•    Po każdym pomiarze należy dodać z hiurety taką objętość 4 M roztworu NatJH, która spowoduje przywrócenie pierwotnej wartości pH, wynoszącej 8,5. Zanotować objętość zasady dodanej po każdym pomiarze. Podczas pomiarów należy zwrócić uwagę czy zawiesina mięsa nie zakleiła elektrody i w razie potrzeby oczyścić elektrodę.

2


Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
CCF13042012001 Podstawy Biotechnologii Ćwiczenie 2 Opracował Piotr Szweda Do katalizowania hydroliz
CCF13042012000 Podstawy Biotechnologii Ćwiczenie 2 Opracował Piotr SzwedaWYZNACZANIE ZMIAN STOPNIA
PTDC0003 (3) Ćwiczenie 2 Opracował Piotr Szweda Pomocna będzie tabela, aby wyznaczyć wykres zmiany s
PTDC0001 (3) ) i    i Podstawy Biotechnologu Ćwiczenie 2 Opracował Piotr Szweda WYZNA
71330 PTDC0001 (3) ) i    i Podstawy Biotechnologu Ćwiczenie 2 Opracował Piotr Szweda
CCF13042012002 * Podstawy Biotechnologii Ćwiczenie 2 Opracował Piotr Szweda Pomocna będzie tabela,
CCF13042012003 Podstawy Biotechnologii Ćwiczenie 2 Opracował Piotr Szweda •    W cel
PTDC0004 (3) Opracował Piotr Szweda •    W celu oznaczenia zawartości wolnych grup ka
hydra is2 2 d) nieprawda, do aproksymowania tej krzywej nic używa się wielomianów, ej żadne z powyżs
Zdjęcie072 (9) Do jakościowego opisywania charakterystyki częstotliwościowej definiuje się

więcej podobnych podstron