CCF13042012002

*

Podstawy Biotechnologii Ćwiczenie 2

Opracował Piotr Szweda

Pomocna będzie tabela, aby wyznaczyć wykres zmiany stopnia hydrolizy DH od czasu

czas	ilość zużyte	go NaOH	DH (%)
	podgrupa A	podgrupa B	podgrupa A	podgrupa B
pomiar 0 - wstępna regulacja pH			-
pomiar 1 - po 5 min. od dodania alkalazy
pomiar 12 - po 60 min.

•    Zakończyć pomiary po 1,5 - 2 godz. procesu. Po tym czasie nie powinny już następować istotne zmiany pH.

•    Po zakończeniu procesu przeprowadzić inaktywację enzymu przez zakwaszenie produktu do pH 6,5 za pomocą 4 M HC1 (HC1 - 36%, 12 M) i zwiększenie temperatury hydrolizatu do 80°C.

•    Zawartość zlewki przesączyć pod obniżonym ciśnieniem na nuczy filtracyjnej. Zanotować objętość przesączu.

Dośw. 11. Oznaczenie wolnych grup karboksylowych i DH metoda miareczkowania formolowego

•    Każda podgrupa bierze 3 Kolbki stożkowa 100/150 ml - Pobrać 5 ml hydrolizatu, dodać kroplę fenoloftaleiny (pipetką) i doprowadzić próbkę do lekko różowej barwy za pomocą 0,5 M roztworu NaOH.

• Następnie dodać do próbki 5 ml aldehydu mrówkowego (pH 8,5) i po pięciominutowej inkubacji w temperaturze 55 °C miareczkować 0,02 M roztworem NaOH aż do lekko różowego zabarwienia. Oznaczenie wykonać w trzech powtórzeniach (ale nie wyciągamy średniej!, tylko dla każdej zużytej objętości 0,02 M NaOH obliczyć zawartość wolnych grup karboksylowych z zależności, a potem z otrzymanych wyników obliczyć średnią zawartość grup karboksylowych - to samo podejście dla prób poddanych całkowitej hydrolizie).

•    Obliczyć zawartość wolnych grup karboksylowych wiedząc, że 1 ml 0,02 M roztworu NaOH reaguje z 20 pmolami kwasu karboksylowego.

•    Tak samo oznaczyć zawartość wolnych grup karboksylowych w dostarczonych przez prowadzącego próbkach poddanych całkowitej hydrolizie w środowisku 6 M HCL

Hydrolizaty te przygotowano umieszczając 0,5 g mięsa w szczelnie zamykanych probówkach z teflonową zakrętką. Do próbek dodano następnie 5 ml 6 M roztworu HC1 i prowadzono reakcję przez 6 godz. w temperaturze 105 °C. Oziębione próbki rozcieńczono niewielką ilością wody destylowanej (5 ml) i przesączano przez węgiel aktywny do kolby miarowej o pojemności 100 ml. Hydrolizat zobojętniono 2 M roztworem NaOH (wobec kropli fenoloftaleiny i miareczkujemy do pH 7) i dopełniono kolbkę wodą destylowaną do objętości 100 ml.

3