img032 (32)

Odczunn i k i

3,87. roztwór cytrynianu sodowego

Bufor octanowy o pH 5,1:    1 cz. 5 n CH3COOH/3 cz. 3 n CHgCOONa

Przygotowanie roztworów HbO^ i HbCO

Krew kontrolną (cytrynianową) zhemolizować przez 10-krotne rozcieńczenie (wyjściowa objętość krwi nie mniejsza niż E cm^J). Hemolizat podzielić na E porcje; A i B. Porcję A umieścić w płuczce lub kolbie ssawkowej i aerować czystym powietrzem stosując pompkę wodną. Część B po umieszczeniu w płuczce wysycać tlenkiem węgla zawartym w gazie świetlnym lub bezpośrednio z generatora CO przez ok. 15 min. (generowanie CO można oprzeć na reakcji odwodnienia kwasu mrówkowego lub szczawiowego za pomocą stężonego kwasu siarkowego).

Wykonan i e oznaczeń i a

3

Odmierzyć do probówki 9 cm wody destylowanej. Dodać 1 cm świeżo pobranej krwi badanej. Zmieszać i odstawić na 5 min. Odmierzyć E cm^ tego hemolizatu, dodać 8 cm^ buforu octanowego o pH 5,1, zmieszać i wstawić do łaźni wodnej o temp. 55°C na 5 min. W tym czasie wytrąca się oksyhemog1obi na. Zawartość probówki oziębić wodą z kranu i przesączyć. Zmierzyć absorbancje prze-sączu wobec próby zerowej (1 cm wody destylowanej + 4 cm^J buforu octanowego) przy dł. fali 540 nm. Wynik odczytać z wykresu ka1 i bracyjnego.

Ka 1 i brać ja

Do 7 probówek odmierzyć kolejno:

N r	Krew wolna od CO A (ml)	Krew nasycona CO B (ml)	Hemoliza (ml H20)	Obj. hemolizatu do dalszych oznaczeń (ml)	Bufor octanowy (ml)	Zawartość HbCO (%)
1	1,0	0,0	9,0	2,0	8,0	0
2	0,9	0,1	9,0	2,0	8,0	10
3	0,8	0,2	9,0	2,0	8,0	20
4	0,6	0,4	9,0	2,0	8,0	40
5	0,4	0,6	9,0	2,0	8,0	60
6	0,2	0,8	9,0	2,0	8,0	80
7	0,0	1,0	9,0	2,0	8,0	100

Postępować

/( /VH.Ć kj 0    (-) !u    OL "Z. !i f‘VU .

jak przy wykonaniu oznaczeń i a<j