4 (1008)

4. 0,2 M bufor octanowy (pH 3,6): 200 cm³

Sprzęt*

1.    bagietki (6 szt), łyżeczki/łopatki, pipety OJ; 1; 5 cm (gdy szklane + pompka, gdy automatyczne + końcówki), zlewki 100 cm³ (6 szt.), cylinder miarowy 100 cm³, probówki szklane (60 szt.) + statywy, kuwety szklane 1 cm z przykrywką, kolba Erlenmayera 1000 cm³;

2.    kolorymctr lub spektrofotokolorymetr, waga, minutnik, maszynka elektryczna lub czajnik elektryczny;

3.    linijki, ołówki, markery, papier milimetrowy, lignina.

Wykonanie:

I: Przegotowanie ekstraktów z materiałów suchych.

Odważyć po 0,5 g materiału roślinnego, przenieść do 100 cm³ zlewek i zulać 55 cm³ wrzącej wody. Odstawić do oziębienia. Przed wykorzystaniem do oznaczenia zumieszać bagietką.

2: Pomiar aktywności antyoksydacyjne] ekstraktów roślinnych.

-    próba ślepa: do probówki dodać kolejno 2,5 cm³ buforu octanowego i 0,02 cm³ 96% etanolu, wymieszać, przelać do kuwety, wyzerować spektrofotokolorymetr (X = 593 nm).

-    próba odczynnikowa: do probówki wlać kolejno 2,5 cm³ buforu octanowego, 0,25 cm³ Kj[Fe(CN)6] i 0,25 cm³ FeClj, wymieszać, przelać do kuwety, zmierzyć A593nm w czasie to. Kuwetę wyjąć ze spektrofotokolorymetru, do mieszaniny odczynników dodać 0,02 cm³ 96% etanolu równocześnie włączyć stoper - rozpoczyna się reakcja. Kuwetę szybko zakryć, wymieszać zawartość, mierzyć As93_iun co 15 sekund w czasie 3 minut. Pomiar przebiegu reakcji wykonać dwukrotnie, policzyć średnie wartości absorbancji w poszczególnych czasach.

-    próba wzorcowa (Troloks): do probówki wlać kolejno 2,5 cm³ buforu octanowego, 0,25 cm³ K3[Fe(CN)6] i 0,25 cm³ FeCl₃, wymieszać, przelać do kuwety, zmierzyć A593_nm w czasie to. Kuwetę wyjąć ze spektrofotokolorymetru, do mieszaniny odczynników dodać 0,020 cm³ 1 mM roztworu Troloksu równocześnie włączyć stoper - rozpoczyna się reakcja. Kuwetę szybko zakryć, wymieszać zawartość, mierzyć A₅93_nm co 15 sekund w czasie 3 minut. Pomiar przebiegu reakcji w próbach badanych wykonać dwukrotnie, policzyć średnie wartości absorbancji w poszczególnych czasach.

-    próba badana: do probówki wlać kolejno 2,5 cm³ buforu octanowego, 0,25 cm³ K₃[Fe(CN)₆] i 0,25 cm FeCl₃, wymieszać, przelać do kuwety, zmierzyć As93_nm w czasie to. Kuwetę wyjąć ze spektrofotokolorymetru, do mieszaniny odczynników dodać 0,020 cm³ badanych materiałów roślinnych równocześnie włączyć stoper - rozpoczyna się reakcja. Kuwetę szybko zakryć, wymieszać zawartość, mierzyć A593_nm, co 15 sekund w czasie 3 minut. Pomiar przebiegu reakcji w próbach badanych wykonać dwukrotnie policzyć średnie wartości absorbancji w poszczególnych czasach.

OPIS WYNIKÓW

1. Na papierze milimetrowym wykreślić krzywe A=f(t) dla próby odczynnikowej, wzorcowego roztworu Troloksu i prób badanych: