Problem: |
Możliwa przyczyna: |
Rozwiązania: |
Śmierć komórek, brak kolonii |
Toksyczne białko, zbyt wysoki poziom ekspresji; |
Silniejsza kontrola ekspresji podstawo wr ej; Słabszy promotor; Niższa temperatura; Mniejsze stężenie induktora; |
Białko w ciałach inkluzyjnych |
Zbyt wysoki poziom ekspresji; |
Słabszy promotor; Niższa temperatura; Mniejsze stężenie induktora; Plazmid o niższej liczbie kopii; |
Brak ekspresji, eksprymowane tylko fragmenty białka |
Problem używalności kodonów; |
Zastosowanie gospodarza dostarczającego rzadkie tRNA; Niższa temperatura; |
Białko nie jest transportowane do peryplazmy |
Sekwencja sygnalna nie rozpoznawana w E.coli; Zbyt mało wydajne mechanizmy translokacji; |
Dołączenie innej sekwencji sygnalnej bądź znacznika; Koekspresja genówr sec; |
Brak ekspresji |
Proteoliza (szczególnie w przypadku białek mniejszych niż 10 kDA); Mutacje wprowadzające kodon stop wewnątrz sekwencji kodującej gen; |
Niższa temperatura; Krótszy czas indukcji; Dołączenie znacznika; S ekwe nc jo no wranie; |