plik


ÿþBiochemia dla Biologii nr ETCS Analiza jako[ciowa tBuszczów ZADANIE 9 TYTUA: ANALIZA JAKOZCIOWA TAUSZCZÓW Forma zaliczenia: Kolokwium z cz[ci teoretycznej do wiczeD oraz praktyczne zaliczenie wiczeD MateriaBy i urzdzenia: " MateriaBy 1. tBuszcze przyniesione przez studentów 2. bezwodny KHSO4 3. st|ony kwas siarkowy 4. bezwodnik octowy 5. 30% NaOH 6. Na2CO3 1M 7. KMnO4 8. etanol 9. chloroform 10. chloroformowy roztwór cholesterolu (0,04%) " Urzdzenia 1. probówki 2. parownice 3. zlewki 4. pipety 5. palniki INFORMACJE TEORETYCZNE:. W czasie ogrzewania tBuszczu z bezwodnym KHSO4 nastpuje rozkBad tBuszczu z uwolnieniem glicerolu, który nastpnie ulega odwodnieniu. powstaje nienasycony aldehyd  akroleina, o charakterystycznym dra|nicym zapachu. TBuszcze jako estry Batwo ulegaj hydrolizie, dajc, w zale|no[ci od czynnika wywoBujcego hydroliz, ró|ne produkty. Je|eli hydroliza zachodzi pod wpBywem pary wodnej, powstaje glicerol i mieszania kwasów tBuszczowych. Je|eli natomiast czynnikiem powodujcym hydroliz s alkalia lub wglany potasowców, wówczas nie otrzymuje si wolnych kwasów tBuszczowych lecz uch sole, czyli mydBa i glicerol. MydBa s solami sBbych kwasów i mocnych zasad. Reaguj z mocnymi kwasami mineralnymi, które wypieraj z nich sBbe i nierozpuszczalne w wodzie kwasy tBuszczowe. Pod wpBywem substancji utleniajcych, np. KMnO4, dochodzi do rozerwania BaDcucha wglowego w miejscu podwójnych wizaD, z równoczesnym utlenieniem atomów wgla do grup karboksylowych. Analizujc produkty rozpadu, mo|na okre[li poBo|enie wizania podwójnego w czsteczce kwasu. Równocze[nie z utlenieniem kwasu nienasyconego zachodzi redukcja utleniacza. W [rodowisku zasadowym i obojtnym mangan redukuje si ze stopnia utlenienia +7 na +4. Do ilo[ciowego oznaczania cholesterolu wykorzystuje si reakcj Liebermanna- Burcharda. Cholesterol pod wpBywem st|onego kwasu siarkowego i w obecno[ci bezwodnika kwasu octowego tworzy kwas monosulfonowy bicholestedianu, charakteryzujcy si zielonym zabarwieniem. Intensywno[ zabarwienia jest proporcjonalna do st|enia cholesterolu. 1 Koordynatorem przedmiotu jest Katedra Biochemii Przedmiot prowadzony przez Katedr Biochemii Biochemia dla Biologii nr ETCS Analiza jako[ciowa tBuszczów Przebieg do[wiadczenia: Podzadanie 1: wykrywanie glicerolu W suchej probówce umie[ci kropl oleju, doda bezwodnego KHSO4 i ogrzewa. Zapisa obserwacj i wycign odpowiednie wnioski. Podzadanie 2: reakcja zmydlania tBuszczów wBa[ciwych Zagotowa 100 ml wody destylowanej. Nastpnie w parownicy umie[ci 2 g tBuszczu, roztopi go i doda 5 ml 30% roztworu NaOH oraz kilka ml etanolu. Ogrzewa Bagodnie, cigle mieszajc, a| do utworzenia jednolitej masy mydlanej. Mas t nale|y przenie[ do zlewki z gorc wod i ogrzewa, mieszajc, a| mydBo si rozpu[ci, tworzc koloidalny roztwór. Roztwór ten zachowa do dalszych do[wiadczeD. Podzadanie 3: wydzielanie z mydeB wolnych kwasów tBuszczowych Do 50 ml roztworu mydBa doda ostro|nie kroplami st|onego kwasu siarkowego, a| roztwór wyka|e odczyn kwa[ny. Zapisa obserwacje i wycign odpowiednie wnioski. Podzadanie 4: wykrywanie nienasyconych kwasów tBuszczowych Do probówki zawierajcej kilka kropel oleju doda 5 ml roztworu 1 M Na2CO3, lekko ogrza i wstrzsajc, dodawa po kropli KMnO4. Zapisa obserwacj i wycign odpowiednie wnioski. Podzadanie 5: ilo[ciowe oznaczanie cholesterolu metod kolorymetryczn Przygotowa 6 czystych i suchych probówek, ponumerowa je i ustawi w statywie. Do kolejnych 5 probówek odmierzy pipet podane w tabeli ilo[ci wzorcowego chloroformowego roztworu cholesterolu (0,04%) i chloroformu, do 6-tej probówki 0,1 g tBuszczu i 4,5 chloroformu. Do ka|dej probówki odmierzy po 2 ml bezwodnika octowego oraz po 0,1 ml st|onego kwasu siarkowego. Wstrzsn probówkami i pozostawi je w ciemnym miejscu na 10 minut. Po upBywie tego czasu zmierzy absorbancj roztworów wzgldem [lepej próby (probówka nr 1) przy 610 nm i wykre[li krzyw wzorcow, z której odczyta zawarto[ cholesterolu w badanej próbce. Wynik poda w mg/100ml i zamie[ci w tabeli. Nr probówki 1 2 3 4 5 6 Wzorcowy roztwór 0 1 2 3 4 cholesterolu w ml Chloroform w ml 5 4 3 2 1 St|enie cholesterolu 0 8 16 24 32 w mg/100 ml Warto[ absorbancji 2 Koordynatorem przedmiotu jest Katedra Biochemii Przedmiot prowadzony przez Katedr Biochemii Biochemia dla Biologii nr ETCS Analiza jako[ciowa tBuszczów LITERATURA 1. Biochemia , L. Stryer, PWN, Warszawa 1997 i nowsze 2.  Biochemia Harpera , R. K. Murray i wsp., PZWL, Warszawa 1995 i nowsze 3. Cytobiochemia , L. KByszejko-Stefanowicz, PWN, Warszawa 1995, 2002 4. Biochemia- Krótkie WykBady , B. D. Hames i wsp., PWN, Warszawa 2002 5. Zarys Biochemii Cz.1, Karlson P., Pwn W-Wa 1987 6. Biochemia krgowców, Minakowski W. PWN W-wa 1998 7. Fizjologia komórki, Giese A., PWN W-wa 1985 8. Podstawy cytofizjologii, Kawiak J. i inni PWN, Warszawa 1996 9. wiczenia z biochemii, L. KByszejko-Stefanowicz, PWN, Warszawa 1999, 2003 10. wiczenia z biochemii, Strze|ek J wyd. ART. 1997 11. wiczenia z biochemii, LogoD A. wyd. ART. 1997 3 Koordynatorem przedmiotu jest Katedra Biochemii Przedmiot prowadzony przez Katedr Biochemii

Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
bioch biol,
bioch biol
bioch biol<
bioch biol
bioch wd 9
wyklad I biol obrazki
Biol eko V
pyt z biol
WYKL 2 biol 2012 studen
biol met 13
Biol eko VI
bioch wd 8
biol model? 2006
Wyklad BIOL ESTYMACJA 2012
J Biol Chem 2016 Gillmaier jbc M115 693481
W5podstawy biol ocz
11 KN Nukleotydy w uk biol

więcej podobnych podstron