37351

Bacillus rnegateriwn Bacillus subtilis

Procedura

1.    Przytrzymując szkiełko podstawowe za brzegi zaznacz na jego spodniej stronie dwa okręgi przy pomocy markera i oznakuj je literami s (subtilis) i m ('megaterium)

2.    W okręgu s nanieś 2 krople wody (pożywka stała)

3.    Wysterylizuj ezę poprzez jej wyżarzenie w płomieniu palnika gazowego. Aby sterylizacja była efektywna należy ogrzać drucik ezy do czerwoności. Przed kontaktem ezy z kulturą, należy ją ostudzić. Chłodzenie ezy do odpowiedniej temperatury trwa około 30 sekund (eza powinna być schłodzona przed kontaktem z pożywką. Wysoka temperatura powoduje rozpryśnięcie pożywki i uwalnianie bakterii do powietrza)

4.    Przygotowanie prepar atu

a)    przy pomocy sclrlodzonej ezy pobierz niewielką ilość kultury ze skosu. Jeżeli usłyszysz syczenie pożywki przy jej kontakcie z ezą, oznacza że ma zbyt wysoką temperaturę; wysterylizuj ezę jeszcze raz i zacznij od początku. Rozprowadź równomiernie komórki w kropli wody, rozmaz powinien wyglądać jak rozcieńczone mleko; po przygotowaniu rozmazu ponownie wysterylizuj ezę

b)    w drugim okręgu przygotuj rozmaz Bacillus rnegateriwn, nie używaj wody, ponieważ bakterie są już zawieszone w płynie; zamieszaj delikatnie bulion w probówce w celu ponownego zawieszenia bakterii opadłych na dnie; przenieś 2-3 razy kulturę przy pomocy ezy; wysterylizuj ezę przed każdym pobraniem kultury; rozprowadź kulturę równomiernie wewnątrz okręgu

c)    wysterylizuj ezę (ezę należy sterylizować za każdym razem przed oraz po jej użyciu)

d)    pozostaw' preparat do całkowitego wyscluuęcia

e)    przytrzymując szkiełko podstawowe użyj jednej z 2 metod do utrwalenia preparatu: (1) przesuń preparat kilka razy przez płomień palnika, (2) nanieś na preparat kilka kropli 95% alkoholu etylowego i pozostaw przez 1 minutę, następnie odwróć preparat, tak by alkohol spłynął i pozostaw preparat do całkowitego wyschnięcia

5.    Barwienie

a)    umieść preparat na wanience

b)    pokryj preparat błękitem metylenu i pozostaw na 30-60 sekund

c)    dokladrue wypłucz nadmiar barwnika wodą destylow'aną z tryska w'ki

d)    pozostaw' preparat aż do wyschnięcia

6.    Przeprowadź obserwację wybarwionego preparatu przy pomocy mikroskopu używając obiektywów suchych oraz obiektywu immersyjnego; umieść olejek immersyjny bezpośrednio na preparacie, bez użycia szkiełka nakrywkowego; narysuj preparaty

7.    Wytrzyj olejek z obiektywu