101645

•    Poznanie struktury przestrzennej, sekwencji, funkcji biologicznej

•    Określenie czy dany gen jest aktywny w komórce, czy ulega transkrypcji

•    Tworzenie biblioteki cDNA

•    Do nothern blottingu

2. Rodzaje eukariotycznego RNA i sposoby wybiórczej izolacji różnych jego rodzajów.

Komórka zawiera 10 ’pg RNA:

•    mRNA: 1-2%, najważniejszy

•    rRNA: 80-85%

•    tRNA, snRNA itd.: razem 10-15%

mRNA- matrycowy (informacyjny)- zawierają przepisaną z genów, zakodowaną informację genetyczną o sekwencji poszczególnych polipeptydów. Cząsteczki te po przyłączeniu się do rybosomów stanowią matrycę - kolejne trójki nukleotydów są rozpoznawane przez antykodony cząsteczek transportujących aminokwasy (tRNA), dzięki czemu w procesie translacji powstaje właściwa sekwencja peptydu. mRNA u eukariotów powstaje podczas transkrypcji jako hctcrogennc hnRNA (pre-mRNA), a następnie ulega obróbce posttranskrypcyjnej, podczas której dodawana jest czapeczka, wycinane są introny (splicing), i dodawany jest ogon poli-A.

rRNA- rybosomalny- wchodzą w skład rybosomów, które biorą udział w procesie biosyntezy polipeptydów. U eukariota za jego transkrypcję odpowiada polimeraza RNA I (wyjątek: 5S rRNA- polimeraza RNA III). rRNA występuje w rybosomach, u eukariontów także w jądrze komórkowym (jąderku).

tRNA- transportujący- przyłączanie wolnych aminokwasów w cytoplazmie i transportowanie ich do rybosomów, gdzie w translacji zostają włączone do łańcucha poi i peptydowego.

siRNA- małe interferujące- powoduje wyciszanie ekspresji genów o homologicznej sekwencji.

miRNA- mikro- regulują ekspresję innych genów. miRNA kodowane są przez genom komórki, jak normalne geny, i transkiybowane przez polimerazę RNA II.

snRNA- mały jądrowy i scRNA- mały cytoplazmatyczny- udział w procesach obróbki pierwotnego transkryptu.

3. Odwrotna transkrypcja w biologii molekularnej: zastosowanie, zasada, sposoby przeprowadzenia, szczegółowy opis przebiegu doświadczenia na ćwiczeniach.

Aby uniknąć degradacji RNA, możemy przepisać go na DNA stosując odwrotną transkrypcję (RT PCR).

Odwrotna transkrypcja- proces przepisania jednoniciowego RNA (ssRNA) przez enzym odwrotną transkiyptazę (RT) na jednoniciowy DNA (cDNA).

2