67267

Układ faz odwróconych układ, w którym faza ruchoma jest bardziej polania niż faza stacjonarna. Materiał wyjściowy stosowany do otrzymywania związanych faz stacjonamycli typu RP:

1.    żel krzemionkowy;

2.    tlenek glinu;

3.    di-tlenek tytanu;

4.    di-tlenek cyrkonu;

5.    polimery organiczne (kopolimer styrenu i diwinylobenzenu. albo poliamidy, lub polimetakrylany i inne). Otrzymywanie niepolamych faz związanych typu RP:

Zalety i wady Żelu krzemionkowego jako „nośnika” związanych faz stacjonarnych

•    Duża odporność mechaniczna

•    Przystępna cena

•    Możliwość sterowania porowatością ziaren wypełnienia

•    Możliwość otrzymywania kolumn o dobrej sprawności

•    Ograniczony zakres pH (2-8)

Inne ..nośniki”: A1203. Zr02. Ti02. SDVB Faza mchoma - wymagania:

1.    Ciecz obojętna chemicznie względem fazy stacjonarnej i składników rozdzielanych mieszanin.

2.    Dobry rozpuszczalnik dla badanych substancji, aby nie dochodziło do ich wytrącania się w kolumnie.

3.    Mała lepkość.

4.    Stały skład przez dostatecznie długi okres czasu.

Szereg clucvinv: woda < metanol < acctonitryl < etanol < tetrahydrofuran < propanol < chlorek metylenu Kolejność elucji

•    Związki chiują od polarnych (hydrofilowych) do niepolamych (hydrofobowych) oraz od w szeregach homologicznych od nisko- do wysokocząstcczkowych

Retencja substancji jest wypadkową wielu oddziaływań:

•    działanie sił van der \ftalsa pomiędzy pomiędzy hydrofobową faza stacjonarną a cząsteczkami substancji

•    działanie sił elektrostatycznych pomiędzy cząsteczkami substancji rozdzielanej, zawierającej polarne grupy funkcyjne i cząsteczkami fazy ruchomej

•    działanie sił van der \aalsa pomiędzy cząsteczkami substancji rozdzielanej i fazy mchomej

•    oddziaływanie elektrostyczne pomiędzy cząsteczkami substancji rozdzielanej i fazy mchomej a powierzchniowymi grupami -OH.

Retencja substancji rośnie ze wzrostem:

•    stopnia pokrycia powierzchni związaną fazą oiganiczną

•    długości łańcucha fazy związanej

•    hydrofobowości grupy funkcyjnej decydującej o charakterze powierzchni sorpcyjnej

•    hydrofobowości substancji rozdzielanych

•    zawartości wody w fazie mchomej

Dla substancji kwaśnych / zasadowych zależy od

•    pH (spadek pH zwiększa retencję substancji kwaśnych, ir wzrost pH - substancji zasadowych

Sposoby prowadzenia elucji

•    Elucja izokratyczna - skład fazy mchomej jest stały

•    Elucja gradientowa- następuje wzrost siły elucyjnej fazy mchomej przez zmianę jej składu w kierunku wzrostu zawartości organicznego modyfikatora eluentu

Elektroforeza - technika analityczna, rzadziej preparatywna, stosowana w chemii i biologii molekularnej, zwłaszcza w genetyce. Jej istotą jest rozdzielenie mieszaniny związków chemicznych na możliwie jednorodne frakcje przez wymuszanie wędrówki ich cząsteczek w polu elektrycznym.

Cząsteczki różnych substancji różnią się zwykle ruchliwością elektroforetyczną. Parametr ten jest w przybliżeniu wprost proporcjonalny do ładunku elektrycznego cząsteczki i odwrotnie proporcjonalny do jej wielkości. Zależy także od kształtu cząsteczki.