84870

2. Redukcja disiarczku do wolnych grup tiolowych oraz oznaczanie ilości wolnych grup tiolowych po redukcji disiarczku

a)    Przygotowano 3 czyste,suche probówki kalibrowane i podpisano jako SI,S2,0

b)    Do probówek SI i S2 dodano po lml roztworu disiarczku,

c)    Do próbki O dodano lml bufom fosforanowego zawierającego 2mM EDTA, pH

8.0,

d)    Przygotowano 2.5% roztwór NaBHt poprzez rozpuszczenie naważki NaBHt w wodzie destylowanej (obliczenia poniżej),

e)    Do roztworów SI £2,0 dodano po lml 2.5% roztworu NaBH4,

f)    Wszystkie roztwory uzupełniono wodą destylowaną do 4 ml i dokładnie

wymieszano,

g)    Roztwory inkubowano w łaźni wodnej (37°C) przez 30 min,

h)    Po zakończonej inkubacji do roztworów dodano 1 ml roztworu KH2PO4. Rozpoczęto pomiar czasu,

i)    Po upływie 5 min. Dodano po 2 ml acetonu w celu usunięcie nieprzereagowanego borowodorku sodu Roztwory wymieszano,

j)    Przez roztwoiy przepuszczano gazowy azot (N₂) przez 5min.,

k)    Do wszystkich mieszanin dodano po 0.5ml 0.01M roztworu kwasu DTNB,

l)    Probówki zatkano korkami i inkubowano przez 15min. w temperaturze pokojowej,

111) Wyzerowano aparat przy 412nm wobec próby kontrolnej. Zmierzono absorbaneję próbek SI, S2. Wyniki zapisano w Tabeli 2.

5. Tabele pomiarowe

Tabela 1.

1 pomiar A412	II pomiar A412	*ir A 412	^^412	Ctnb-IM]	C^psh(M]
0,005	0,002	0,0035	0,1905	2,5735 E-7	5,4044 E-7

Tabela 2.

Próbka	A4J2	A ^4,2	Błąd [%]	Ctnb (M)	C^shIM)	C„[M]
SI	0,189	0,194	2,6	0,000014	0,000107	0,000053
S2	0,199

6. Obliczenia

Obliczanie sredmei wartości absorbancn:    A._tl2 = —-— ---= 0,0035

Obliczanie średniej absorbancii przy 412nm:    AAjj₂ = Ajj J - Affajf = 0,194-0,0035=0,1905

Obliczanie stężenia molowego anionu nitromerkaptobenzoesowego:

A = C_TNB- -E-1**C_tnb- =    = 2,5735 E- 7 M

Gdzie: A-absorbancja

C - stężenie substancji rozpraszającej w roztworze E - współczynnik ekstynkcji substancji rozpraszającej (13600 M ‘ cm’¹)

I - droga optyczna (1 cm)

Obliczanie wyjścioweRO stężenia wolnych grup tiolowych C^_f{ =    •^>-^ł0ł4/^ ⁷ 2 X _ 5 4044E-7 M