3784503777

ZAŁĄCZNIK 2 Strona 14 z 42

podstawie przeprowadzonych analiz określiłam optymalne stężenie gentamycyny i amikacyny (2,5 - 5 mg/ml) dla procesu immobilizacji tych antybiotyków na protezie naczyniowej mając na uwadze satysfakcjonującą wydajność procesu immobilizacji (35 -37%) i ilość antybiotyku, która wiąże się w tych warunkach z protezą (ok. 8 - 10 mg w przeliczeniu na 1 g matrycy) gwarantując skuteczną ochronę przedwbakteryjną zmodyfikowanej powierzchni biomateriału. W immobilizacji obu antybiotyków na protezie brały udział trzy typy oddziaływań: fizyczne (adsorpcja), jonowe i kowalencyjne, przy czym dominującym wiązaniem było wiązanie kowalencyjne. Interakcje niekowalencyjne (pasywne lub jonowe) były możliwe ze względu na porowatą strukturę protez (włókna PET) i obecność grup chemicznych o przeciwnych ładunkach w cząsteczkach żelatyny i antybiotyku aminoglikozydowego. Z zastosowaniem metody HPLC oceniłam udział poszczególnych typów wiązań utworzonych pomiędzy antybiotykiem, a protezą monitorując stężenie uwolnionego leku w płynach płuczących. Biernie związany antybiotyk był usuwany przez płukanie wodą, zaś całkowite usunięcie jonowo związanego leku wymagało użycia roztworu NaCl. Badanie pokazało, że wiązania niekowalencyjne stanowiły stosunkowo nieznaczną część całkowitej ilości związanego antybiotyku; w granicach 1 - 3% (adsorpcja fizyczna) i ok. 18% (adsorpcja fizyczna + wiązanie jonowe). Testy mikrobiologiczne potwierdziły obecność trzech rodzajów oddziaływań pomiędzy amikacyną i żelatyną pokrywającą powierzchnie protez naczyniowych. Obecność stref zahamowania wzrostu bakterii Escherichia coli wokół protez ze związanym antybiotykiem świadczyła o dyfuzji antybiotyku do soli fizjologicznej obecnej w bulionie agarowym, zaś hamowanie wzrostu E. coli tylko w strefie bezpośredniego kontaktu pomiędzy protezą, a murawą bakteryjną świadczyło o wiązaniu kowalencyjnym.

Wyniki badań dotyczące oceny wiązania gentamycyny i amikacyny zostały opublikowane w formie dwóch prac oryginalnych jako artykuły w czasopiśmie:

Grażyna Ginalska, Dorota Kowalczuk. Monika Osińska. A Chemical method of gcntamicin bonding to gelatine-sealed prosthetic vascular grafts. Int. J. Pharm. 2005; 288(1): 131 - 140.

Grażyna Ginalska. Dorota Kowalczuk. Monika Osińska. Amikacin-loaded vascular prosthesis as an effective drug carrier. Int. J. Pharm. 2007; 339(1/2): 39 - 4.