6827068965

WYKŁAD 7

Redagowańie/Edytowaniu genomu

Motorem opracowania nowych metod wprowadzania zmian w genomie było niezadowolenie z istniejących metod zmniejszania ilości produktu badanego genu

•    Inaktywacja genu poprzez rekombinację homologiczną - na otrzymanie myszy transgenicznej trzeba czekać ok. 1 roku (ludzkie komórki są trudniejsze, au innych organizmów, ze względu na brak genów reporterowych i niedostosowane procedury-jest to jeszcze bardziej problematyczne)

•    Wyciszanie genu - antysensowne oligonukleotydy, siRNA

>    Efekt niecałkowity

>    Efekt niespecyficzny

>    Czasowa redukcja ekspresji

Nowe podejście - zmiana genomu przy zastosowaniu specyficznie zaprojektowanych nukleaz

Metody edytowania genomu

Modyfikacje genomu z użyciem miejscowo specyficznych nukleaz (które metodami inżynierii genetycznej można zmodyfikować tak, aby rozpoznawały i cięły cząsteczkę DNA w miejscu wybranym przez eksperymentatora) opierają się na katalizowaniu powstawania dwuniciowych pęknięć oraz ich naprawy na drodze rekombinacji przez jeden z dwóch szlaków naprawczych -NHEJ lub HR.

•    Meganukleazy

•    Nukleazy z motywem palca cynkowego (ZFN)

•    Nukleazy TALE

•    Oraz modyfikacje bakteryjnego systemu odpornościowego CRISPR/Cas

Meganukleazy

•    Samonaprowadzające endonukleazy znalezione u Prokariota i niższych Eukariota

•    Ze względu na występujące w nich motywy można podzielić je na 5 rodzin

>    GIY-YIG

>    HNH

>    His-Cys box

>    PD-(D/E)XK

1