9150222838

— 114 —

. _nie reszty v-glutamylowej z do_no.

^cepr_iVa!'“°^"'^l'^o0enZ°tlKsy-⁴-ⁿ’^{,roan,lld 4 G}'^yG'^v '

““ ' '    _glu.a^°-³:S;“^y-amin₀-2-nitrobenzoesanu.

V., - glutamy^loGIV    _ść powstającego w reakcji

Miarą *****rżenie    oznacza * k*.

~ 9 nitrobenzoesa"

5-amino-2-niuu

ry metrycznie.

Odczynniki:

Odczynnik roboczy do oznaczania GGT o składzie:

1.    6mM L-y -glutamylo-3-karboksy-4-nitroanilid (substrat-donor)-

2.    150 mM roztwór glicyloglicyny (substrat-akceptor), w 100 i

buforze Tris-HCI o pH 8,0. Przed użyciem odczynniki 1 j p⁰™ mieszane się w proporcji 1:5;    ^s3

3.    surowica krwi jako źródło enzymu.

Wykonanie:

Oznaczenie aktywności GGT w surowicy:

1.    Umyć, osuszyć jedną probówkę i odmierzyć do niej 1 ml odczynnika do oznaczania aktywności GGT Wstawić probówkę do łaźni wodnej o temp. 37 °C na 5 min (preinkubacja).

2.    Wyzerować aparat przy długości fali 405 nm względem wody destylowanej.

3.    Po wyciągnięciu probówki z łaźni wodnej dodać 50 gl surowicy, wymieszać dokładnie I przelać w całości do kuwety.

4.    Po 30 s odczytać absorbancję próby przy długości fali 405 nm

i następnie dokonać kolejnych pomiarów w odstępach 30-sekun-dowych (przez 2 min).

Opracowanie wyników:

^Obliczyć średnią różnicę absorbancji (AAbs/min)

^Określić aktywność enzymu w IU/I na podstawie podanego poniżej wzoru.

gdzie: V = 1,05 ml 1000

AAbs/min x 1,05 * 1000

~9^Tm^05    ⁼ AAbs/min * 2211

-    całkowita objętość próby

-    przelicznik mililitrów na litry (1000 ml = 1 I)