5523191342

2. Określenie miana bakteriofaga T4 metodą płytek dwuwarstwowych.

a)    każda podgrupa rozlewa sterylnie do 6 probówek Eppendorfa (każdy student do 2 probówek) bulion odżywczy w ilościach podanych na schemacie;

b)    przy pomocy mikropipet dokonujemy sterylnego rozcieńczenia zawiesiny bakteriofaga T4 zgodnie ze schematem;

Przy rozcieńczaniu zawiesin bakteriofagów obowiązują te same reguły, które obowiązują przy rozcieńczaniu płynnych hodowli bakterii.

c)    wyjmujemy z łaźni probówkę z rozpuszczonym 0.6% AO i sterylnie wlewamy do niej 0.3 ml hodowli szczepu Escherichia coli B_i równie szybko 0.1 ml odpowiedniego rozcieńczenia bakteriofaga . Po zamieszaniu na wytrząsarce, wylewamy całość na płytkę z AO. Płytkę pozostawiamy do zastygnięcia!!!

d)    identycznie postępujemy z próbkami pozostałych rozcieńczeń bakteriofaga T4 (patrz schemat).

Wszystkie płytki inkubujemy 24 godz. w temp. 37 °C.

001 ml 0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml

10'²    10‘³ lO'⁴

0.1 ml

nmm

awiesina , _m, _{pf 09 m}| _{pf 0} 9 _{ral pf 0}.9 ml pf    0.9 ml pf

2 pl. AO

10'⁶

i\

0.1 ml

[»

0 0

5 ml 0.6% AO + 0.3 ml hodowli Escherichia coli B

16