2906542556

[3]

INHIBITORY PROTEAZ

231

obecność 13 inhibitorów trypsyny i chymotrypsyny w bulwach tej odmiany ziemniaka (26). Zastosowanie metody ogniskowania izoelektrycz-nego pozwoliło na wyizolowanie aż 9 z tych inhibitorów oraz ustalenie ich punktów izoelektrycznych. Oznaczono również ich skład aminokwa-sowy i aminokwasy N-końcowe. Jeden z wyizolowanych inhibitorów występuje w formie tetrameru i dysocjuje na podjednostki w 6 M roztworze chlorowodorku guanidyny.

Opracowano metodę oczyszczania inhibitora I chymotrypsyny z ziemniaka odmiany Russet Burbank (7). Metoda ta polega na frakcjonowaniu białek ziemniaka przez doprowadzenie do punktu izoelektrycznego, wy-solenie siarczanem amonu, ogrzewanie w temperaturze 80°C i sączenie

5    10    15

A Glu-Phe-Glu-Cys-Asp-Gly-Lys-Leu-GIn-Trp-Pro* Glu- Leu- lle-Gly

^B    -Lys-

C    -Lys-

D    -Asn-

20    25    30

^%    Val-Pro-Thr-Łys-Leu-Ala-Lys-Glu-lłe-lle-Glu-Lys-Gln-Asn-Ser-

-Gly-

-Gly-

-Gly-

35    40    45

-Leu-He-Ser-Asn-Val-His-lle-Leu-Leu-Asn-Gly-$er-Pro-Val-Thr-

-Thr-

-Thr-

-Thr-

50    55    60

-Leu-Asp-lle-Leu-Gly-Asp-Val-Val-Gln-LeuPro-Val-Val-Gły-Met-

-Asp-Jle-

-Asp-lle-

-Asn- -Asp-lle-

65    70    75

-Asp-Phe-Arg-Cys-Asp-Arg-Val-Arg-Leu-Phe-Asp-Asp-lle-Leu-Gly-

-Tyr-	-Asn-
-Tyr-	-Asn-	-Asn-
-Tyr-	-Asn-	-Asn-
	80

-Ser-Val-Val-Gln-!le-Pro-Arg-Val-Ala

-Tyr-

-Asn-

-Asn-

Ryc. 1. Sekwencja aminokwasów podjednostki A, B, C i D ziemniaczanego inhibitora I chymotrypsyny (31).

W sekwencjach podjednostki B, C i D podano jedynie aminokwasy znajdujące się w identycznych pozycjach ale różne w porównaniu z podjednostką A.