2906542745

[151 PARAMETRY KINETYCZNE REAKCJI 133

kreślonych dla różnych wartości [A]₀, spełniające warunek: t = 0, mają współrzędne odpowiednio v₀ i v₀/[A]₀ oraz l/v₀ i 1/[A]₀. Linie proste poprowadzone przez punkty o tych współrzędnych mają zaś nachylenie odpowiednio — K_m i K_m/V a przecinają oś rzędnych w punkcie V lub 1/V, a więc analogicznie jak w dwu innych graficznych przedstawieniach liniowej transformacji równania Michaelisa stosowanych w metodzie szybkości początkowej (19, 20, 21, 22).

Rycina 9 przedstawia wykreśloną dla reakcji hydrolizy acetylotyro-zynohydroksyamidu, katalizowanej przez chymotrypsynę zależność ([A]₀^-— [A])/t—ln([A]₀/[A])/t w której to reakcji jeden z jej produktów (acety-lotyrozyna) jest kompetycyjnym inhibitorem aktywności enzymatycznej (20).

Nie tak rzadko mamy do czynienia z reakcjami enzymatycznymi przebiegającymi z wytworzeniem kilku produktów z których każdy kompe-tycyjnie hamuje aktywność enzymu (Schemat 3):

E + A -.—^: E A • E + P1 + P2+ ••• + P_n

*-1

E+P^EP,; E + P₂==EP₂;...,

E + P„

K-(n +2)

Schemat 3

Równanie szybkości reakcji ma wtedy postać (20):

n    n

(11.15)    Vt = K_m(l+[A]₀    l/K_Pj)ln([A]₀/[A]) + (l-K_m^ l/K_Pj)

j=i    j=i

([A]o - [A]),

gdzie K_P[, K_Pj,......, K_Po to odpowiednie stałe dysocjacji kompleksów

utworzonych w trakcie odwracalnego wiązania się enzymu z produktami reakcji. W sytuacji tej wyznaczana stała inhibitorowa zdefiniowana jest

n

następująco: 1/K_P = V 1/K_P.

j = i    ¹

Mając do czynienia z reakcjami przebiegającymi wedle schematu 3 najczęściej chodzi nam o określenie efektu jaki na przebieg katalizy enzymatycznej wywiera osobno każdy z poszczególnych produktów. Dla dokonania tego Foster i Niemann (20) zalecają przeprowadzanie pomiarów przebiegu reakcji w obecności różnych, określonych stężeń każdego z produktów dodanego do mieszaniny inkubacyjnej przed rozpoczęciem reakcji. Równanie opisujące przebieg reakcji w tych warunkach ma postać:

Yt = (1 -K_m/K_P)([A]₀-[A])+ K_m(l +[A]₀/K_p + [i]/K,) ln([A]₀/[A]),

(11.16)