365605995

-    nalać płyn Lugola na 1 minutę;

-    spłukać wodą;

-    odbarwiać alkoholem przez 15-20 sekund;

-    spłukać wodą;

-    dobarwić przez zalanie na 20 sekund roztworem fuksyny;

-    spłukać wodą;

-    osuszyć lekko odciskając w bibule.

Wynik barwienia:

Bakterie gramdodatnie - fioletowogranatowe, gramujemne - różowe.

0    wyniku barwienia w metodzie Grama decyduje grubość warstwy peptydoglikanu ściany komórkowej. Warstwa peptydoglikanu bakterii gramdodatnich jest grubsza niż u bakterii gramujemnych. Fiolet krystaliczny przedostaje się do wnętrza komórki i łącząc się z jodem tworzy nierozpuszczalny w wodzie kompleks, który zabarwia ją na kolor fioletowy. Alkohol stosowany jako odbarwiacz, rozpuszcza błonę cytoplazmatyczną bakterii gramdodatnich oraz błonę cytoplazmatyczną

1    błonę zewnętrzną bakterii gramujemnych. Powoduje on również odwodnienie peptydoglikanu, uszczelniając w ten sposób ścianę komórkową. Gruba warstwa peptydoglikanu bakterii gramdodatnich skutecznie zatrzymuje barwny kompleks jodu z fioletem krystalicznym. W przypadku bakterii gramujemnych kompleks ten wydostaje się na zewnątrz przez cienką warstwę peptydoglikanu. Fuksyna jako barwnik kontrastowy zabarwia komórki bakterii gramujemnych na różowo.

Metoda barwienia negatywno-pozytywnego

Barwienie metodą negatywno-pozytywną jest jedną z technik wykrywania otoczek u bakterii. Komórka bakteryjna zabarwiana jest barwnikiem zasadowym, a tło kwaśnym. W metodzie tej można używać różnych barwników. Dla zabarwienia komórki - najczęściej stosuje się fuksynę z dodatkiem fuksyny karbolowej, dla zabarwienia tła - nigrozynę lub kolargol.