3893820155

Polimorfizm długości fragmentów restrykcyjnych (RELP) jako metoda ustalania tożsamości wykorzystująca analizę przecinania DNA nukleazami restrykcyjnymi (wykorzystanie wzoru utworzonego w genomie przez mutacje punktowe charakterystyczne dla konkretnej osoby, uniemożliwiające działanie nukleaz restrykcyjnych w miejscu ich występowania). W jej przebiegu rozcina się DNA określoną kombinacją nukleaz i powstałe fragmenty poddaje elektroforezie.

Następnie przeprowadza się hybrydyzację z użyciem określonej sondy, ujawniając wzór odcinków, które zawierają te sekwencje (zależny o mutacji punktowych).

Metoda ta jest stosowana do ustalania pokrewieństwa, ojcostwa, oraz przynależności danych próbek DNA do konkretnej osoby.

Łańcuchowa reakcja polimerazy (PCR) jako metoda otrzymywania dowolnej liczby kopii fragmentu DNA o określonej sekwencji wykorzystująca zdolność polimerazy DNA do kopiowania jednoniciowych odcinków DNA. Na początku procesu dwuniciowy DNA umieszcza się w roztworze ze starterami (krótkie odcinki DNA komplementarne do początku i końca fragmentu DNA, który ma być sklonowany), czterema rodzajami _

Przebieg reakcji PCR

Reakcja PCR przebiega w 3 etapach cyklicznie, w zmieniających się temperaturach:

Etap I: denaturacja

Pod wpływem wyższej temperatuiy(95st.C) podwójna nić DNA rozpada się na pojedyncze nici

który chcemy powielić.

⁵-rffrrminmnTnTTTTrrriiTiTinTTrTniiTr_miiTrniiiTTTm^^ y

Tmnmrm 3’ Etap lir wydłużanie

W kolejnych cyklach reakcji PCR ilość powielonych fragmentów pierwotnej matrycy DNA ulega zwiększeniu w postępie geometrycznym, osiągając nawet do 1 miliona kopii (po 30-40 cyklach). Dzięki temu możliwa jest analiza mikrośladów biologicznych, a nawet pojedynczych komórek.

5 Schemat przebiegu PCR

trifosfonukleozydów oraz polimerazą Taq DNA (termoodporną), który jest ogrzewany do temperatury 363 K powodując denaturację DNA do dwóch

komplementarnych nici. Następnie roztwór jest schładzany do 323-333 K wywołując przyłączanie się starterów do końców pojedynczych nici oraz rozpoczęcie działania polimerazy Taq i wydłużanie nici. Cały cykl powtarza się kilkadziesiąt razy.

Różnica między PCR a klonowaniem polega