5192605614

26 J. DUSZYŃSKI [10]

(72—73). Podejście to jest jednak utrudnione faktem, że tylko nieskom-pleksowane z jonami wapnia i magnezu nukleotydy adeninowe są substra-tami translokazy i dlatego też przedstawiony wzór (równanie 6) jedynie do takich postaci nukleotydów się odnosi. W komórce, zarówno w mi-tochondriach jak i w cytoplazmie, jedynie bardzo niewielka frakcja ATP czy ADP pozostaje nieskompleksowana. Obliczenie stężeń nieskomplekso-wanych, całkowicie zjonizowanych nukleotydów na podstawie oznaczonych w komórce lub mitochondriach stężeń całkowitych jest bardzo trudne (11). Duże kłopoty sprawia też dokładne oznaczenie wartości potencjału błonowego innymi metodami (17, 45—46). Dlatego też podejście, w którym sprawdza się czy translokaza jest w równowadze na podstawie porównywania wartości i zmierzonych różnic w stosunkach ATP/ADP (równanie 6), jest poddawane w wątpliwość.

O wiele pewniejsze wydaje się podejście polegające na porównaniu pul nukleotydów adeninowych w mitochondriach pracujących z różnym obciążeniem translokazy nukleotydów adeninowych. Przykładem może być doświadczenie, którego wyniki podano w tabeli II (65).

Tabela II

Pule nukleotydów adeninowych w preparatach mitochondrialnych oddychających z tą samą szybkością i syntetyzujących a) cytrulinę i b) glukozo-6-fosforan (według 65)

	Wewnątrzmitoch.	Zewnątrzmitoch.
a) synteza cytruliny
ATP	10.2 (nmole/mg białka)	153 OjlM)
ADP	3.1 (nmole/mg białka)	2.9 (nM)
ATP/ADP	3.3	53
b) synteza glukozo-
-6-fosforanu
ATP	9.6 (nmole/mg białka)	151 ([lM)
ADP	3.0 (nmole/mg białka)	6.6 (|xM)
ATP/ADP	3.2	23

W tabeli przedstawiono wewnątrz- i zewnątrz-mitochondrialne stosunki ATP/ADP w zawiesinie mitochondriów, które inkubowano w dwóch układach: a) syntezy glukozo-6-fosforanu, w którym translokaza pracuje intensywnie i b) syntezy cytruliny, w którym obciążenie translokazy jest nieznaczne. Stwierdzono, że przy identycznej szybkości oddychania, wewnątrzmitochondrialne stosunki ATP/ADP są takie same w obu tych układach. Taka sama jest też wartość potencjału elektrycznego na błonie, A 'I¹ (nie pokazano). W wewnątrzmitochondrialnych stosunkach ATP/ADP obserwujemy jednak istotne różnice. Wytłumaczyć je można jedynie zakładając, że translokaza nukleotydów adeninowych w fosforylujących mitochondriach nie jest ani w równowadze, ani też blisko równowagi. Dalsze prace poparły tę konkluzję (74—75).