7808335473

gdy nadwrażliwość na CNs, (3-LG i ALA są ze sobą powiązane to alergia na BSA występuje całkowicie niezależnie.

W wyniku wielu badań udało się scharakteryzować i opisać 2 główne alergeny zaangażowane w CMA: kazeinę (asl-CN) i p-laktoglobulinę.

P -laktoglobulina (P-LG) należy do białek serwatkowych, jest globularną albuminą o masie cząsteczkowej 18,4 kDa, stanowi ok. 50% białek serwatkowych. Stężenie P -LG w mleku krowim wynosi ok. 3,2-3,5 g-L'¹.

P-LG należy do nadrodziny lipokalin, jest jednym z najlepiej scharakteryzowanych białek wiążących lipidy i jest zdolne do wiązania szerokiego zakresu cząsteczek włączając retinol, 0-karoten, nasycone i nienasycone kwasy tłuszczowe i węglowodory alifatyczne. Posiada 3 mostki dwusiarczkowe i jest obecne w kilku odmianach, przy czym najbardziej powszechne są warianty A i B minimalnie różniące się składem aminokwasów. P-LG występuje naturalnie jako mieszanka monomerów i dimerów, przy czym proporcja monomerów wzrasta po ogrzewaniu do 70°C. Jej pojedynczy łańcuch peptydowy zbudowany jest ze 162 aminokwasów, spośród których należy wymienić metioninę, nieodzowny składnik racjonalnego żywienia.

P-LG uczula do 80% chorych z CMA, prowokacja doustna dzieci z CMA wypadała dodatnio u 62% badanych. Istotną rolę w uczulających własnościach tego białka odgrywa laktoza (ogólny odsetek węglowodanów w P-LG wynosi 0,1%). Ogólnie P-LG posiada wiele (co najmniej 8) epitopów. Trzy z nich są uważane za większe. W P-LG możemy wyróżnić następujące fragmenty peptydów, pierwsze z nich są rozpoznawane przez 97, 92 i 89% ludzkich surowic: AA 102-124, AA41-60 i AA 149-162. Drugą grupę peptydów stanowią AA 1-8, AA25-40, AA92-100 rozpoznawane przez 58-72% ludzkich surowic, ostatnia grupa obejmuje peptydy AA9-14, AA84-91i AA92-100 rozpoznawane przez 40% ludzkich surowic.

Odczynniki, roztwory, sprzęt, aparatura, materiał do badań

>• Odczynniki i roztwory:

- odczynnik WR do oznaczenia białka, w skład którego wchodzą:

• BCA Protein Assay Reagent A,

• BCA Protein Assay Reagent B,

- bufor fosforanowy (płuczący) PBS (2 1) o następującym składzie:

• KH₂P0₄ (0,754 g), Na₂HP0₄(l 1,464 g), NaCl (18 g), Tween 20 (2 ml), dopełnić wodą

destylowaną do 21

- bufor węglanowy o pH 9,6 otrzymany po rozpuszczeniu 1 kapsułki odczynnika firmy Sigma w 100 ml H₂0 destylowanej