9524124391

Autoreferat dr Tomasz Gosiewski

5. Porównanie skuteczności metody nmPCR z metodą FISH, zestawem SeptiFast (Roche) oraz hodowlą krwi - publikacja nr 5.

4.3.3. Szczegółowe omówienie osiągnięcia naukowego:

Publikacja nr 1

(badaniapilotażowe - zastosowanie klasycznego PCR do wykrywania bakterii na podstawie sekwencji lóSrRNA w krwi)

Praca miała charakter badań pilotażowych. W ich ramach przeprowadzono badania polegające na zastosowaniu klasycznej amplifikacji PCR przy użyciu pary starterów, pozwalających na wykrycie obecności bakterii w badanych próbkach krwi. Wyniki uzyskiwano na agarozowym żelu elektroforetycznym. Jednocześnie, podjęto próbę wykorzystania metody fluorescencyjnej hybrydyzacji in situ (FISH) do detekcji bakterii bezpośrednio w badanych próbkach krwi. Do tej pory w literaturze naukowej opisywano zastosowanie FISH do wykrywania i różnicowania gatunkowego bakterii w sepsie, ale tylko w dodatnich hodowlach krwi. Przeprowadzono też badania płynów hodowlanych po hodowli krwi.

Próbki krwi pochodziły od pacjentów z klinicznymi objawami sepsy. Pacjenci byli kwalifikowani do badania przez lekarza. Równolegle z badaniami przy pomocy metody PCR i FISH, próbki krwi były poddawane rutynowej diagnostyce mikrobiologicznej, przy pomocy metody posiewu.

Odsetek wyników pozytywnych dla próbek krwi wynosił: 71,4%; 28,6% i 10,7% odpowiednio dla PCR, FISH i hodowli krwi. Różnice pomiędzy wynikami uzyskanymi za pomocą metod PCR i FISH oraz PCR i hodowli krwi były statystycznie istotne. W przypadku analizy próbek podłóż hodowlanych, odsetek wyników dodatnich dla metody FISH wynosił 58,3%, natomiast dla metody hodowlanej 33,3%. Różnica ta nie była statystycznie istotna. Czas potrzebny do uzyskania wyniku badania przy użyciu metod PCR i FISH wynosił ok. 4-5 godzin.

Uzyskane rezultaty wstępnie potwierdziły skuteczność metody PCR i FISH w szybkiej diagnostyce bakteryjnych zakażeń krwi.

Kraków, 2015