Adam Łapiński

Maciej Płoński gr.10

Sprawozdanie nr 6

Temat: Analiza bakteriologiczna wody dla celów sanitarnych.

1. Zakres ćwiczenia:

-wykonanie analizy bakteriologicznej wody wodociągowej, przeprowadzając oznaczenie „ogólnej” liczby bakterii psychrofilnych i mezofilnych oraz bakterii coli metodą fermentacyjną probówkową,

-wykonanie analizy bakteriologicznej wody powierzchniowej, przeprowadzając oznaczenia „ogólnej” liczby bakterii psychrofilnych i mezofilnych oraz bakterii coli typu kałowego metodą fermentacyjno probówkową,

-zinterpretować uzyskane wyniki zgodnie z „Rozporządzeniem Ministra Zdrowia z dnia. 29 marca 2007 (Dz. U. 2007 Nr 61 poz. 417) w sprawie jakości wody przeznaczonej do spożycia przez ludzi”

-sklasyfikować wodę powierzchniową zgodnie z Załącznikiem nr 1 do Rozporządzenia Ministra Środowiska z dnia 11 lutego 2004 (Dz.U.2004 Nr 32, poz 284)

2. Cel ćwiczenia:

Dokonanie oceny stopnia zanieczyszczenia wody wodociągowej i wody powierzchniowej.

3. Wykonanie ćwiczenia

Dla wody powierzchniowej:

W celu oznaczenia ogólnej liczby bakterii wykonujemy posiew głębinowy próbek na podłoże agarowe odżywcze metodą płytkową Koha. Posiewy wykonujemy z rozcieńczeń w zakresie od 10^-2-10^-5. Następnie posiewy inkubujemy przez 72h w temperaturze 22°C i 24h w temperaturze 37°C.

Tabela 1. Wyniki oznaczania ogólnej liczby bakterii psychrofilnych i mezofilnych w wodzie powierzchniowej.

Oznaczenie	Warunki chodowli		liczba kolonii w badanej próbie				Ogólna liczba w 1 cm^3
		Podłoże	Temperatura	10^-2	10^-3	10^-4		10^-5
Ogólna liczba bakterii hodowanych psychrofilnych na agarze	Agar odżywczy zwykły	22 °C	35	5	-	-	4250
Ogólna liczba bakterii hodowanych Mezofilnych na agarze	Agar odżywczy zwykły	37°C	15	4	-	-	2750

Oznaczenie bakterie grupy coli typu kałowego metodą fermentacyjno probówkową

Etap I.

Dokonujemy posiewu rozcieńczeń od 10⁰ do 10^-4 wody powierzchniowej na podłoże laktozowe z purpurą bromokrezolową, po 2 probówki każde rozcieńczenie. Inkubujemy hodowle przez 24-48h w temperaturze 37°C

Etap II

Materiał ze wszystkich dodatnich i wątpliwych prób z badania wstępnego poddajemy badaniu potwierdzającemu metodą testu szybkiego. W tym celu materiał z hodowli przesiewamy na podłoże płynne z zielenią brylantową oraz na wodę peptonową z tryptofanem do wykrywania indolu. Hodowle inkubujemy w temperaturze 44°C w ciągu 24-48h. Po 24 godzinach obserwujemy wzrost bakterii. Za wynik dodatni próby fermentacyjnej na podłożu z zielenią brylantową uznajemy obecność gazu i zmętnienie próbki. Wytworzenie indolu z tryptofanu sprawdzamy w próbówkach w których nastąpiło zmętnienie. W tym celu dodajemy odczynnik Ehrlicha-Bohme'a. Pojawienie się po kilku minutach na granicy płynów czerwonego zabarwienia świadczy o obecności indolu.

Tabela 2. Wyniki oznaczania bakterii grupy coli typu kałowego w wodzie powierzchniowej.

Oznaczenie	warunki hodowli		Obserwacja wzrostu					NPL/100cm^3	Miano
		Podłoże	inkubacja	10^0	10^-1	10^-2	10^-3			10^-4
	Etap wstępny	laktozowe z purpurą bromokrezolową	24-48h	+	-	-	-			-	620	0,2
						+	+			-	-	-
	Etap potwierdzający			laktozowe z zielenią brylantową	24-48h	+	-			-	-	-
						+	+			-	-	-
				woda peptonowa z tryptofanem	24-48h	+	-			-	-	-
						+	+			-	-	-

NPL/100cm³-najbardziej prawdopodobna liczba bakterii w 100cm³ wody

Miano- najmniejsza objętość wody w której wykrywa się obecność bakterii

Dla wody wodociągowej:

W celu oznaczenia ogólnej liczby bakterii wykonujemy posiew głębinowy próbek na podłoże agarowe odżywcze metodą płytkową Koha. Posiewy wykonujemy wprowadzając 1cm³ wody wodociągowej do jednej płytki i 0,1 cm³ tej samej wody do płytki drugiej. Następnie posiewy inkubujemy przez 72h w temperaturze 22°C i 24h.

Tabela 1. Wyniki oznaczania ogólnej liczby bakterii psychrofilnych i mezofilnych w wodzie wodociągowej.

Oznaczenie	Warunki chodowli		liczba kolonii w badanej próbie		Ogólna liczba w 1 cm^3
		Podłoże	Temperatura	1cm^3		0,1cm^3
Ogólna liczba bakterii psychrofilnych	Agar odżywczy zwykły	22 °C	53	4	47
Ogólna liczba bakterii Mezofilnych	Agar odżywczy zwykły	37°C	14	0	7

Oznaczenie bakterii grupy coli metodą fermentacyjno probówkową.

Etap I

Na podłoże laktozowe z purpurą bromokrezolową o stężeniu podwójnym dokonujemy posiewu 1x50cm³ oraz 5x10cm³. Zaszczepione podłoże inkubujemy przez 24-48h w temperaturze 37°C.

W żadnej probówce nie otrzymaliśmy zmian. Wynika z tego, że NPL/100cm³ wynosi 0 a miano jest większe od 100.

Brak kolejnych etapów.

Wnioski:

-Ogólna liczba bakterii psychrofilnych w wodzie powierzchniowej wynosi 4250/cm³.

-Ogólna liczba bakterii mezofilnych w wodzie powierzchniowej wynosi 2750/cm³.

-Najbardziej prawdopodobna liczba bakterii grupy coli typu kałowego w 100cm³ wody powierzchniowej: NPL/100cm³=620.

Zgodnie z załącznikiem nr 1 do rozporządzenia Ministra Środowiska z dnia 11 lutego 2004 (Dz.U. 2004 Nr 32, poz. 284) dotyczącym wartości granicznych wskaźników jakości wody w klasach jakości wód powierzchniowych badaną próbkę wody na podstawie liczby bakterii grupy coli typu kałowego w 100ml można zakwalifikować do III klasy czystości.

-Ogólna liczba bakterii psychrofilnych w wodzie wodociągowej wynosi 47/cm³.

-Ogólna liczba bakterii mezofilnych w wodzie wodociągowej wynosi 7/cm³.

-Najbardziej prawdopodobna liczba bakterii Escherichia coli w 100cm³ wody wodociągowej : NPL/100cm³=0.

Zgodnie z załącznikiem nr 1A do rozporządzenia Ministra Zdrowia z dnia 29 marca 2007 roku (Dz.U. 2007 Nr 61, poz. 417) dotyczącym podstawowych wymagań mikrobiologicznych badaną próbkę wody na podstawie liczby bakterii Escherichia coli w 100ml można uznać za wodę zdatną do spożycia przez ludzi.

Zgodnie z załącznikiem nr 3 do rozporządzenia Ministra Zdrowia z dnia 29 marca 2007 roku (Dz.U. 2007 Nr 61, poz. 417) dotyczącym dodatkowych wymagań mikrobiologicznych jakim powinna odpowiadać woda badaną próbkę wody na podstawie ogólnej liczby mikroorganizmów w 22 oraz 36°C w 1cm³ możemy uznać za wodę bezpieczną dla zdrowia ludzkiego.

---