1

SPRAWOZDANIE Z ĆWICZEŃ NR 1 Z BIOLOGII MOLEKULARNEJ ROŚLIN

IZOLACJA DNA Z POMIDORA

1. Rozpuściliśmy 4 g soli kuchennej w wodzie (4 g = 1 łyżeczka).

2. Do osobnego naczynia wlaliśmy 2 łyżki stołowe płynu do naczyń.

3. Delikatnie przelaliśmy roztwór soli do płynu do naczyń (tak, aby się nie spienił)

4. Pokroiliśmy pomidora na drobne kawałki, nieprzekraczające 0,5 cm.

5. Przełożyliśmy pokrojonego pomidora do naczynia z roztworem soli kuchennej wymieszanej z

płynem do mycia naczyń.

- roztwór soli kuchennej z detergentem powoduje rozpad błon komórkowych, błon organelli i

innych błon komórkowych, uwalniając składniki wnętrza organelli, w tym DNA

6. Inkubowaliśmy pojemnik z ‘zupą pomidorową’ przez 15 minut w temperaturze 60

o

C.

-inkubacja przyspiesza rozpad błon i denaturuje DNAzy, które mogłyby powodować trawienie

DNA. Gdybyśmy inkubowali dłużej doszłoby do denaturacji DNA.

7. Zawiesinę oziębiliśmy w pojemniku z kostkami lodu.

8. Mieszaninę zmiksowaliśmy przez 3 – 5 sekund.

-poprzez miksowanie mechanicznie niszczymy ściany komórkowe, doprowadzając do wylania

się zawartości komórek. Miksowanie nie może trwać zbyt długo, ponieważ doprowadziłoby

do mechanicznego zniszczenia DNA.

9. Przefiltrowaliśmy roztwór przez podwójny filtr do kawy, do cylindra miarowego.

10. Do przesączu dodaliśmy 5 kropli soku ze świeżego ananasa i pozostawiliśmy na 5 minut.

-sok z ananasa zawierający proteazy powoduje trawienie białek znajdujących się w

mieszaninie.

11. Przelaliśmy przesącz z cylindra do 6 probówek.

12. Bardzo powoli, po ściance probówki nalaliśmy do każdej identyczną objętość etanolu (jak

naszego przesączu). Alkohol utworzył warstwę nad przesączem

-stężony etanol powoduje wytrącanie się DNA z roztworu.

13. DNA wytrącało się do warstwy alkoholowej w postaci cienkich, długich nitek.

2

ELEKTROFOREZA W MYDELNICZCE

1. Przygotowaliśmy bufor: 1 g(?) sody oczyszczonej rozpuściliśmy w 1,2 l wody.

2. Do pojemnika do elektroforezy włożyliśmy grzebień tak, aby końce grzebieni znajdowały się

jakiś 2 mm nad dnem kuwetki.

3. Przygotowaliśmy 1% roztwór agaru w buforze. Roztwór agaru krótko ogrzaliśmy w kuchence

mikrofalowej.

4. Lekko schłodzony roztwór agaru wlaliśmy do naczynia do elektroforezy.

5. W czasie, gdy żel zastygał przygotowaliśmy roztwór obciążający: wysycony roztwór cukru w

wodzie.

6. Zalaliśmy żel buforem tak, aby jego powierzchnia była pokryta buforem.

7. Przy brzegach umieściliśmy elektrody tak, aby częściowo były zanurzone w buforze.

Delikatnie wyjęliśmy grzebień z żelu.

8. Do rowków w żelu nanieśliśmy barwnik wymieszany z roztworem obciążającym.

9. Podłączyć baterię, barwnik będzie wędrował około 20 minut.

10. Po 20 minutach obserwowaliśmy wędrówkę barwnika w żelu agarowym.