UNIWERSYTET PRZYRODNICZY

Wydział Medycyny Weterynaryjnej

KATEDRA BIOCHEMII I FIZJOLOGII ZWIERZĄT

Zakład Biochemii

20-033 Lublin, ul. Akademicka 12

tel. [phone]

09-11-19 www.biochfiz.up.lublin.pl Wersja 3.19.11.09

- 1 z 4 -

Dializa płynów ustrojowych, adsorpcja

dializa mleka, adsorpcja na w

ę

glu medycznym

Zadanie 1

Celem zadania jest przeprowadzenie dializy mleka oraz sprawdzenie

poprawno

ś

ci wykonania procesu poprzez oznaczenie składników roztworu

podializacyjnego.

Wykonanie

Otrzymany odcinek rury dializacyjnej z uwodnionej celulozy (NADIR),

długo

ś

ci ok. 25 cm i

ś

rednicy mikroporów 2,5-3,0 nm, zwil

ż

y

ć

w wodzie

destylowanej. Jeden z ko

ń

ców tej rury skr

ę

ci

ć

i zawi

ą

za

ć

mocno nitk

ą

.

Do tak przygotowanego woreczka dializacyjnego nala

ć

dokładnie od-

mierzone 50 cm

3

mleka. Napełniony woreczek dializacyjny zawi

ą

za

ć

tak

ż

e

z jego drugiej strony, pozostawiaj

ą

c nad warstw

ą

wypełnienia nieco wol-

nej przestrzeni. Spłuka

ć

wod

ą

destylowan

ą

z tryskawki t

ę

zewn

ę

trzn

ą

cz

ęść

woreczka, na której mogłyby pozostawa

ć

ewentualne

ś

lady mleka.

Woreczek przetrze

ć

do sucha skrawkiem ligniny lub bibuły.

Do zlewki odmierzy

ć

cylindrem dokładnie 150 cm

3

wody destylowanej i

w tej wodzie umie

ś

ci

ć

napełniony mlekiem woreczek dializacyjny.

Przez 30 minut prowadzi

ć

proces dializy w temperaturze pokojowej,

co pewien czas delikatnie poruszaj

ą

c woreczkiem.

Po zako

ń

czonej dializie wyj

ąć

woreczek ze zlewki i ponownie zmie-

rzy

ć

obj

ę

to

ść

roztworu w zlewce.

W roztworze podializacyjnym ze zlewki przeprowadzi

ć

próby jako

ś

cio-

we na obecno

ść

jonów: Cl

-

, Ca

2+

, PO

4

3-

oraz prób

ę

na obecno

ść

laktozy

(próba redukcyjna).

Wykona

ć

te

ż

prób

ę

biuretow

ą

na obecno

ść

białka w roztworze podiali-

zacyjnym. Po ostro

ż

nym otwarciu woreczka dializacyjnego pobra

ć

0,2 cm

3

mleka i po rozcie

ń

czeniu 0,8 cm

3

wod

ą

destylowan

ą

oznaczy

ć

st

ęż

enie

białka metod

ą

biuretow

ą

(wykonanie opisane ni

ż

ej).

Wyniki oznacze

ń

zanotowa

ć

w tabeli.

Wykrywanie jonów Cl

-

Do 1 cm

3

roztworu podializacyjnego doda

ć

kroplami 0,5 cm

3

roztworu

0,1 mol/dm

3

Ag NO

3

.

W obecno

ś

ci jonów Cl

-

pojawia si

ę

biały, opalizuj

ą

cy AgCl.

Wykrywanie jonów Ca

2+

Do 1 cm

3

roztworu podializacyjnego doda

ć

0,5 cm

3

roztworu 0,2

mol/dm

3

szczawianu amonu (NH

4

)

2

C

2

O

4

lub 0,2 mol/dm

3

szczawianu potasu

K

2

C

2

O

4.

Wytr

ą

ca si

ę

krystaliczny osad szczawianu wapnia.

Wykrywanie jonów PO

4

3-

Do 1 cm

3

roztworu podializacyjnego doda

ć

5 kropli st

ęż

onego HNO

3

i

0,5 cm

3

roztworu 0.1 mol/dm

3

molibdenianu amonowego. Prób

ę

ogrza

ć

nad

UNIWERSYTET PRZYRODNICZY

Wydział Medycyny Weterynaryjnej

KATEDRA BIOCHEMII I FIZJOLOGII ZWIERZĄT

Zakład Biochemii

20-033 Lublin, ul. Akademicka 12

tel. [phone]

09-11-19 www.biochfiz.up.lublin.pl Wersja 3.19.11.09

- 2 z 4 -

palnikiem kilka minut a

ż

do pojawienia si

ę

ż

ółtego osadu molibdeniano-

fosforanu amonowego.

Wykrywanie laktozy

Do 1 cm

3

roztworu podializacyjnego doda

ć

0,5 cm

3

odczynnika Fehlinga

I i 0,5 cm

3

odczynnika Fehlinga II. Prób

ę

ogrzewa

ć

do wrzenia a

ż

pojawi

si

ę

ż

ółty, pomara

ń

czowy lub czerwony osad tlenku miedzi(I) Cu

2

O.

Wykrywanie białka (próba biuretowa)

Do 1 cm

3

roztworu podializacyjnego doda

ć

4 cm

3

odczynnika miedziowe-

go.

Równolegle do tej próby wykona

ć

prób

ę

biuretow

ą

na białko zawarte w

mleku przed dializ

ą

: 0,2 cm

3

mleka, 0,8 cm

3

wody destylowanej i 4 cm

3

odczynnika miedziowego. Porówna

ć

wyniki oznacze

ń

białka w obu próbach

mleka.

Oznaczenie

Wynik

Wykrywanie jonów Cl

-

Wykrywanie jonów Ca

2+

Wykrywanie jonów PO

4

3-

Wykrywanie laktozy

Wykrywanie białka

Zadanie 2

Celem zadanie jest przeprowadzenie adsorpcji kwasów organicznych

(kwasu octowego) na w

ę

glu aktywnym w celu demonstracja leczniczych wła-

ś

ciwo

ś

ci carbo medicinalis

Wykonanie

Z kwasu octowego o st

ęż

eniu 0,5 mol/dm

3

przez rozcie

ń

czenie wod

ą

przygotowa

ć

roztwory CH

3

COOH o st

ęż

eniu 0,12 mol/dm

3

i 0,03 mol/dm

3

. W

tym celu do kolbek sto

ż

kowych A i B odmierzy

ć

podane w tabelce obj

ę

to-

ś

ci kwasu i wody.

kolbka

CH

3

COOH

0,5 mol/dm

3

H

2

O

st

ęż

enie rozcie

ń

czenie

pH

A

12cm

3

38cm

3

0,12

~ 4 x

2,8

B

3cm

3

47cm

3

0,03

~ 16 x

3,2

UNIWERSYTET PRZYRODNICZY

Wydział Medycyny Weterynaryjnej

KATEDRA BIOCHEMII I FIZJOLOGII ZWIERZĄT

Zakład Biochemii

20-033 Lublin, ul. Akademicka 12

tel. [phone]

09-11-19 www.biochfiz.up.lublin.pl Wersja 3.19.11.09

- 3 z 4 -

Z kolbki A pobra

ć

5 cm

3

roztworu kwasu octowego do nowej kolbki

sto

ż

kowej oznaczonej np. 1, a z kolbki B pobra

ć

10 cm

3

roztworu do

kolbki oznaczonej np. 2.

Do kolbek 1 i 2 doda

ć

kilka kropli fenoloftaleiny, a nast

ę

pnie

miareczkowa

ć

mianowanym roztworem NaOH o st

ęż

eniu 0,1M. Obliczy

ć

rze-

czywiste st

ęż

enie otrzymanych roztworów kwasu octowego i porówna

ć

z ob-

liczonymi (w tabelce).

Do kolbek A i B doda

ć

1g w

ę

gla aktywnego (w

ę

giel dokładnie odwa

ż

y

ć

na wadze), a nast

ę

pnie kolbki ostro

ż

nie wytrz

ą

sa

ć

przez 30 minut. Za-

warto

ść

przes

ą

czy

ć

i pobra

ć

po 10 cm

3

zawarto

ś

ci do nowych kolbek sto

ż

-

kowych oznaczonych np. 1` i 2` doda

ć

wska

ź

nika, miareczkowa

ć

mianowanym

roztworem NaOH. Obliczy

ć

st

ęż

enie kwasu octowego w kolbkach po adsorp-

cji.

Znaj

ą

c st

ęż

enie kwasu przed adsorpcj

ą

C

0

i po adsorpcji C obliczy

ć

liczb

ę

moli kwasu octowego, która została zaadsorbowana przez 1 gram

w

ę

gla aktywnego.

X

A

= (C

0

– C) * V

A

;

X

B

= (C

0

– C) * V

B

gdzie:

X –

liczba moli zaadsorbowanego kwasu,

V

– obj

ę

to

ść

roztworu, dla kolbki A V = 45 cm

3

, a dla kolbki B

V = 40 cm

3

c

o

–

st

ęż

enie kwasu przed adsorpcj

ą

, w mol/dm

3

.

c –

st

ęż

enie kwasu po absorpcji, w mol/dm

3

Wynik zanotowa

ć

w tabeli:

kolba

A

B

c

0

- st

ęż

enie kw. octowego

przed adsorpcj

ą

w mol/dm

3

c - st

ęż

enie kw. octowego

po adsorpcji w mol/dm

3

X - liczba moli kw. octowego zaad-

sorbowana na 1 g w

ę

gla aktywnego

Porówna

ć

wpływ st

ęż

enia kwasu octowego na zdolno

ś

ci adsorbcyjne

w

ę

gla aktywnego.

Notatki

UNIWERSYTET PRZYRODNICZY

Wydział Medycyny Weterynaryjnej

KATEDRA BIOCHEMII I FIZJOLOGII ZWIERZĄT

Zakład Biochemii

20-033 Lublin, ul. Akademicka 12

tel. [phone]

09-11-19 www.biochfiz.up.lublin.pl Wersja 3.19.11.09

- 4 z 4 -

Notatki