Ćwiczen

ie

6b

. M

ikr

o

b

io

lo

gia

o

gó

ln

a iśro

d

o

wi

sk

o

wa

. P

rz

yg

o

to

wa

ł:

Ja

kub

Baran

ek

1

Ćwiczenie 7 (MOiŚ)

T: Identyfikacja bakterii do gatunku na podstawie ich właściwości fizjologicznych i biologicznych.

1) Szeregi biochemiczne – metoda klasyczna
2) Szybkie testy biochemiczne typu API

W identyfikacji wykonuje się co najmniej 20 testów biochemicznych. Czasami należy wykonać nawet 50
ponieważ tylko 90% szczepów wykazuje wszystkie typowe cechy gatunku. Duża uciążliwość w
przygotowywaniu podłoży i samej identyfikacji spowodowała opracowanie szybkich testów
identyfikacyjnych. Jedną z największych firm produkujących takie testy jest API.

1) Testy API

Oparte na identycznych podłożach i odczynnikach co tradycyjne testy ale wszystkie składniki
podłoża są w formie zliofilizowanej i umieszczone są w niewielkich minikuwetkach. Kuwetki te
ukształtowane są w plastikowej kasetce. Całość umieszczona jest w rynience.
Wyróżniamy rozmaite testy API:
API 20 E - I

DENTYFIKACJA BAKTERII Z RODZINY

E

NTEROBACTERIACEAE W OPARCIU O

20

CECH

BIOCHEMICZNYCH

API 20 STREP - I

DENTYFIKACJA BAKTERII Z

G

RUPY STREPTOCOCCUS W OPARCIU O

20

CECH

BIOCHEMICZNYCH

API 20 STAPH - I

DENTYFIKACJA BAKTERII Z

G

RUPY STAPHYLOCOCCUS W OPARCIU O

20

CECH

BIOCHEMICZNYCH

API 20 NE – non Enterobacteriaceae
API 50 CHB – I

DENTYFIKACJA BAKTERII Z

G

RUPY

B

ACILLUS W OPARCIU O

50

CECH

BIOCHEMICZNYCH

API RAPID – odczyt następuje już po 4 godzinach ale czułość identyfikacji jest nieco gorsza

Procedura identyfikacji za pomocą testów API
1. Inokulacja:
a) otrzymujemy 24 godzinną hodowlę mikroorganizmów na podłożu stałym
b) kolonię bakteryjną zawieszamy w 5 ml 0,85% NaCl
c) umieszczamy zawiesinę w dołkach wg instrukcji producenta (rys.1)



Do wszystkich dołków wlewamy pipetą zawiesinę tak, żeby nie wtłoczyć pod

plastikowe osłonki pęcherzyków powietrza.



Zawiesinę wlewamy tylko pod plastikowe osłonki, pozostawiając „miseczki” nie

zapełnione (patrz rysunek).



Testy, których oznaczenia otoczone są trzema kreskami zalewamy do końca

zawiesiną (aż do menisku wypukłego)



Testy, których oznaczenia są podkreślone pojedynczą kreską zalewamy parafiną aż

do menisku wypukłego.



Reszta testów pozostaje bez zmian.

d) Do rynienki wlewamy wodę, a następnie umieszczamy tam kasetkę z testami
e) inkubujemy 24-48 h w optymalnej dla danego organizmu temperaturze

Ćwiczen

ie

6b

. M

ikr

o

b

io

lo

gia

o

gó

ln

a iśro

d

o

wi

sk

o

wa

. P

rz

yg

o

to

wa

ł:

Ja

kub

Baran

ek

2

Rys.1. Instrukcja umieszczania zawiesiny bakteryjnej w testach API

2. Odczyt testów identyfikacyjnych API
f) po inkubacji testu dodajemy odczynniki wg instrukcji producenta:

do TDA dodajemy FeCl

3

do VP dodajemy po 1 kropli KOH i alfa-naftolu

g) inkubujemy test jeszcze kilkanaście minut (opcjonalnie)
h) odczytujemy reakcje dodatnie i ujemne, korzystając z instrukcji producenta
i) wprowadzamy wyniki do programu komputerowego APILAB i wskazujemy gatunek

bakteryjny.

Jeżeli w programie komputerowym wynik identyfikacji jest wątpliwy, cały test należy

powtarzać aż do uzyskania wiarygodnego wyniku

ZADANIE:
1) Zidentyfikować gatunek bakterii na podstawie podanych testów biochemicznych metodą klasyczną
2) Zidentyfikować gatunek bakterii za pomocą testu API