Ćwiczenie 7

Morfologia komórki bakteryjnej- barwienie bakterii.

1. Barwienie proste

Materiały: hodowle płynne szczepów bakteryjnych, 0,5% roztwór fioletu krystalicznego, woda destylowana, szkiełka: przedmiotowe i nakrywkowe.

Wykonanie:

1. szkiełko przedmiotowe odtłuścić dokładnie przy pomocy mydła i suchej szmatki

2. ezą nanieść kroplę własnej hodowli bulionowej na szkiełko przedmiotowe i rozmazać delikatnie.

3. wysuszyć

4. tak przygotowany rozmaz utrwalić nad płomieniem palnika

5. następnie nanieść krople barwnika (fiolet krystaliczny) i barwić około minuty.

6. preparat przemyć wodą, wysuszyć i oglądać pod mikroskopem przy powiększeniu max 40x

2. Barwienie złożone (barwienie Grama)

Materiały: hodowle płynne szczepów bakteryjnych, 0,5% roztwór fioletu krystalicznego, płyn Lugola, fuksyna, alkohol etylowy, woda destylowana, szkiełka: przedmiotowe i nakrywkowe.

Wykonanie:

1. przygotować rozmazy (analogicznie jak przy barwieniu prostym) następujących hodowli bakteryjnych: hodowla mieszana, hodowle wzorcowe [gram(+), gram(-)]

2. barwić roztworem fioletu krystalicznego przez około 3 minuty

3. spłukać preparat woda destylowaną

4. zalać preparat płynem Lugola na około 3 minuty

5. spłukać wodą destylowaną

6. zalać preparat alkoholem etylowym na około 30 s, w celu odbarwienia

7. spłukać wodą destylowaną

8. barwić fuksyna przez 15 s

9. spłukać woda destylowaną

10. wysuszyć

11. oglądać pod mikroskopem, przy powiększeniu jak wyżej.

3. Barwienie otoczek- barwienie negatywne metodą Dornera

Materiały: bulionowa hodowla Sarcina lutea, roztwór nigrozyny

Wykonanie:

1. zmieszać kroplę zawiesiny bakteryjnej z taką samą objętością roztworu nigrozyny.

2. zrobić rozmaz za pomocą szkiełka podstawowego.

3. wysuszyć preparat na powietrzu i oglądać pod mikroskopem przy powiększeniu obiektywu max 40x.

Obserwujemy na ciemnym tle jasne plamy- otoczki, w centrum niezabarwione komórki.

---