Wyznaczanie kinetyki procesów enzymatycznych poprzez pomiar

szybkoœci

zu¿ycia

tlenu

przez

mikroorganizmy

(aktywnoϋ

oddechowa).

Wprowadzenie

Jednym z wygodniejszych sposobów pomiaru aktywnoœci oddechowej osadu czynnego jest u¿ycie

zestawu skùadaj¹cego siê z sondy tlenowej, tlenomierza i rejestratora. Zasada pomiaru jest nastêpuj¹ca: specjalne
naczynie pomiarowe wyposa¿one w szczeln¹ przykrywkê z miejscem na zamocowanie sondy tlenowej
caùkowicie wypeùniamy badanym osadem tak, aby wewn¹trz nie byùo powietrza. Sygnaù z sondy tlenowej
umieszczonej w naczyniu pomiarowym jest wysyùany do tlenomierza, którego wskazania w sposób ci¹gùy
odwzorowywane s¹ na taœmie rejestratora. Poùo¿enie pisaka rejestratora odpowiada chwilowemu stê¿eniu tlenu
w naczyniu pomiarowym (mg O

2

/dm

3

). Taœma rejestratora przesuwa siê z zadan¹ prêdkoœci¹ (np. 1 cm/min).

Dziêki temu mo¿na w prosty sposób wyznaczyã szybkoœã zmian stê¿enia tlenu w naczyniu (mg O

2

/dm

3

ÿh), czyli

aktywnoœã oddechow¹.

Sprzêt i odczynniki



zestaw do pomiaru aktywnoœci oddechowej:


naczynie pomiarowe z sond¹ tlenow¹,



tlenomierz,



rejestrator,



mieszadùo magnetyczne;



roztwór glukozy lub innego ùatwo przyswajalnego substratu,



strzykawka

Wykonanie doœwiadczenia

Wykonaã pomiary aktywnoœci oddechowej dla ró¿nych stê¿eñ substratu, mierz¹c za ka¿dym razem:



aktywnoœã podstawow¹



aktywnoϋ po wprowadzeniu substratu

Iloœã pomiarów oraz stê¿enia podaje prowadz¹cy zajêcia.

Opracowanie wyników

1. Wypeùniã tabelê wyników dla ka¿dego pocz¹tkowego stê¿enia substratu:

Objêtoœã roztworu

substratu wprowadzona

do naczynia pomiarowego

[ml]

Stê¿enie substratu w

naczyniu

pomiarowym S [mg/l]

Aktywnoϋ oddechowa

AO [mg O

2

/dm

3

ÿh]

1/S

1/AO

3. Wykreœliã wykres zale¿noœci 1/AO od 1/S dla równania Lineweavera-Burka. Na podstawie wspóùczynników
regresji liniowej wyznaczyã staù¹ Michaelisa K

m.

i maksymaln¹ szybkoœã reakcji (akt. oddechow¹) AO

max

. (patrz

rys. poni¿ej).

4. Sporz¹dziã wykres Michaelisa-Menten.
Zaznaczyã na wykresie wartoœci K

m.

i

AO

max

.

1/AO

1/S

-1/K

m

1/AO

max

id105417859 pdfMachine by Broadgun Software - a great PDF writer! - a great PDF creator! - http://www.pdfmachine.com http://www.broadgun.com