Synteza i badania 

Synteza i badania 

biologiczne dimerycznych 

biologiczne dimerycznych 

analogów fragmentu 

analogów fragmentu 

ubikwityny 

ubikwityny 

mostkowanych za pomoc

mostkowanych za pomoc

ą 

ą 

glikoli polietylenowych

glikoli polietylenowych

 

 

Cel pracy:

Cel pracy:

• Optymalizacja warunków syntezy dimerycznych oraz 

monomerycznych analogów fragmentu ubikwityny 
mostkowanych za pomocą glikoli polietylenowych



LEDGRTLSDY

LEDGRTLSDY

 PEG jednorodny
 PEG niejednorodny

• Oczyszczenie zsyntezowanych związków.
• Określenie immunomodulatorowych właściwości 

otrzymanych związków.

 

 

Kierunki działania 

Kierunki działania 

ubikwityny - 

ubikwityny - 

ubikwitynacja

ubikwitynacja

•

 

 

działanie 

działanie 

immunomodulatorowe

immunomodulatorowe

•

 

 

związanie, a następnie 

związanie, a następnie 

prezentowanie nieprawidłowo 

prezentowanie nieprawidłowo 

funkcjonującego białka 

funkcjonującego białka 

proteasomowi w celu jego proteolizy

proteasomowi w celu jego proteolizy

• 

regulacja cyklu komórkowego,

regulacja cyklu komórkowego,

•

 

 

białko szoku termicznego, białko 

białko szoku termicznego, białko 

stresu,

stresu,

•

 

 

komponent PHF w chorobach 

komponent PHF w chorobach 

neurodegeneracyjnych,

neurodegeneracyjnych,

•

 

 

regulacja ekspresji genów, 

regulacja ekspresji genów, 

utrzymanie struktury chromatyny,

utrzymanie struktury chromatyny,

•

 

 

białko transferowe,

białko transferowe,

•

 

 

białka typu UCRP,

białka typu UCRP,

 stymulacja różnicowania 
limfocytów T oraz B
 immunofilina
 aktywność 
immunosupresorowa

 

 

Struktura 

Struktura 

trzeciorzędowa 

trzeciorzędowa 

ubikwityny

ubikwityny

Funkcja:

Funkcja:



 

 

nieodwracalna, 

nieodwracalna, 

selektywna destrukcja 

selektywna destrukcja 

białek

białek



 

 

odwracalna, 

odwracalna, 

posyntetyczna 

posyntetyczna 

modyfikacja białek

modyfikacja białek

Gly-76

Gly-76

Lys-48

Lys-48

 

 

Działanie 

Działanie 

immunomodulatorow

immunomodulatorow

e

e

Struktura ubikwityny z wyeksponowanym 

Struktura ubikwityny z wyeksponowanym 

fragmentem wykazującym aktywność 

fragmentem wykazującym aktywność 

immunomodulatorową (50-59)

immunomodulatorową (50-59)

LEDGRTLSDY

LEDGRTLSDY

 

 

Dimeryzacja 

Dimeryzacja 

glikolem 

glikolem 

polietylenowym

polietylenowym

H

2

N-LEDGRTLSDY-OH

• 

dobrze rozpuszczalne w wodzie 

i rozpuszczalnikach 

organicznych

• nietoksyczne, nie wykazują 
cytotoksyczności

• nie wykazują immunogenności

• zwiększenie stabilności związku
• zmniejszona degradacja przez enzymy 

metaboliczne

• zmniejszenie lub eliminacja 
immunogenności
•wzrost rozpuszczalności oraz 
biodostępności
• podwyższa walory farmakologiczne

HO-(CH

2

CH

2

-O)

n

-CH

2

-CH

2

-OH

 

 

Peptydy 

Peptydy 

dimeryczne

dimeryczne

Peptydy 
monomeryczn
e

 

 

F

F

F

F

F

O

C

C

C

C

C

C

H

DIE
A

                           

  ,  

DCC

                          

Schemat 

Schemat 

procesu 

procesu 

dimeryzacji

dimeryzacji

 

 

958.4706

3+

1203.1398

1415.1938

2+

800

900

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700 m/z

0.0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

8

x10

Intens.

Wysokorozdzielcze widmo MS dimerycznego peptydu 
mostkowanego glikolem niejednorodnym

 

 

899.7695

3+

907.0967

914.4444

3+

921.7717

929.1206

3+

936.4467

3+

943.7956

3+

958.4706

3+

965.7984

3+

973.1462

3+

980.4733

3+

987.8218

3+

1002.4980

3+

1009.8247

3+

1017.1740

3+

1031.8500

3+

1046.8593

900

920

940

960

980

1000

1020

1040

m/z

0.0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

8

x10

Intens.

n = 10

n = 9

n = 8

n = 7

n = 6

n = 11

n = 12

n = 13

n = 14

n = 15

n = 16

2H

+

 + 

Na

+

2H

+

 + Na

+

2H

+

 + Na

+

2H

+

 + Na

+

2H

+

 + Na

+

2H

+

 + Na

+

Wysokorozdzielcze widmo MS dimerycznego peptydu 
mostkowanego glikolem niejednorodnym – seria [MH

3

]

3+

 

 

Schemat 

Schemat 

procesu 

procesu 

monomeryzacj

monomeryzacj

i

i

, DIEA

Struktura amidoestru 

Struktura amidoestru 

dikarboksylowego analogu 

dikarboksylowego analogu 

glikolu polietylenowego

glikolu polietylenowego

CH

2

CH

2

C

H

2

O

CH

2

C

H

2

O

F

F

F

F

F

O

C

C

C

C

C

C

C

H

2

O

C

CH

3

CH

2

CH

2

CH

2

NH

O

C

12

 

 

6 3 2 . 3 3 9 1

3 +

7 5 6 . 9 3 1 6

2 +

8 5 7 . 9 6 1 4

2 +

9 4 8 . 0 0 2 8

2 +

' 1 0 1 5 . 5 1 7 9

3 +

1 0 5 4 . 4 8 4 6

1 +

6 0 0

7 0 0

8 0 0

9 0 0

1 0 0 0

1 1 0 0

m / z

0 . 0

0 . 2

0 . 4

0 . 6

0 . 8

1 . 0

1 . 2

9

x 1 0

I n t e n s .

M

obl. 

= 1894,0021 

g/mol
M

dośw

. = 1894,0158 

g/mol

Wysokorozdzielcze widmo MS monomerycznego 
peptydu mostkowanego glikolem jednorodnym

 

 

Widmo fragmentacyjne MS/MS-CID dimerycznego peptydu 

mostkowanego glikolem jednorodnym PEG(LEDGRTLSDY-NH

2

)

2

 dla jonu 

m/z 1495,2341 ([MH

2

]

2+

) - energia kolizji 45eV

630.3194

1+

811.3923

1+

926.4192

1+

'1314.6448

2+

'1405.1809

2+

'1495.7172

2+

1768.8813

1+

1883.9430

1+

1998.9674

1+

2180.0459

1+

D

E

G

D

18.0163

E

D

D

Y

Y

D

Y

D

18.0099

18.0104

D - 0.0004

600

800

1000

1200

1400

1600

1800

2000

2200

m/z

0

1

2

3

4

8

x10

Intens.

y

8

y

7

y

9

y

6

b

9

b

3

b

2

b

9

b

8

b

2

 

 

Schemat fragmentacji peptydu II (A) oraz jego etapy 

fragmentacji (B i C)

(jon m/z 1495,2341, energia kolizji 45eV)

A

A

C

C

B

B

 

 

Wyniki badań biologicznych

Wyniki badań biologicznych

 

 

– 

– 

badanie humoralnej 

badanie humoralnej 

odpowiedzi immunologicznej*

odpowiedzi immunologicznej*

•

 

 test Jernego

• określenie liczby AFC 
produkujących IgM

 

 

peptyd

dawka 

(μg)

AFC 

(średni

a)

SE

P (test 

studen

ta)

% 

supres

ji

Próbka 

kontrol

na

 

1000,00

37,42

 

 

I

1

609,25

35,01

0,0001

39

10

430,00

26,46

0,0001

57

100

545,00

45,00

0,0001

46

II

1

568,25

29,95

0,0001

43

10

511,00

41,56

0,0001

49

100

470,00

23,80

0,0001

53

IV

1

745,00

20,62

0,0008

26

10

550,00

64,55

0,0001

45

100

435,00

33,04

0,0001

57

Ubikwit

yna

1

654,50

25,69

0,0001

35

10

559,00

15,62

0,0001

44

100

645,50

75,35

0,0001

35

1 μg

10 μg

100 

μg

Peptyd 
I

Peptyd 
II

Peptyd 
IV

Ubikwity
na

*Instytut Immunologii i Terapii 
Doświadczalnej Polskiej 
Akademii Nauk we Wrocławiu; 
Zakład prof. M. Zimeckiego 

 

 

Podsumowani

e

• Zsyntezowałam, oczyściłam oraz potwierdziłam 

strukturę nowych dimerycznych analogów 

immunomodulatorowego fragmentu ubikwityny

– Zsyntezowałam, oczyściłam oraz potwierdziłam 

strukturę monomerycznych analogów 

immunomodulatorowego fragmentu ubikwityny

• Zbadanie właściwości immunomodulatorowych 

otrzymanych peptydów*

– Zastosowanie łącznika glikolu polietylenowego wpływa 

na wzrost hamowania humoralnej odpowiedzi 

immunologicznej

– Dimeryzacja immunomodulatorowego fragmentu (50-

59) ubikwityny powoduje wzrost immunosupresji 

peptydu

*Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk we 
Wrocławiu; Zakład prof. M. Zimeckiego