Oznaczenie receptorów

Oznaczenie receptorów

powierzchniowych leukocytów

powierzchniowych leukocytów

metodą cytometrii przepływowej

metodą cytometrii przepływowej

z uwzględnieniem innych zastosowań tej techniki

z uwzględnieniem innych zastosowań tej techniki

Katarzyna Krawczak
Michał Pasternak

Liniowy przepływ komórek

Liniowy przepływ komórek



Wielkość i ziarnistość
oceniane na podstawie
rozproszenia światła



Laser wzbudza barwniki
fluorescencyjne
przyczepione do
przeciwciała

Sorter

Sorter

Badanie proliferacji

Badanie proliferacji

CFSE

-

Pobierane przez
komórki do wnętrza

-

„Rozcieńczane” w
komórkach po
podziałach

Znakowanie markerów

Znakowanie markerów

powierzchniowych

powierzchniowych

Markery

powierzchniowe

- Odróżnianie

komórek układu
odpornościowego

-

Przeciwciało
przyczepia się do
powierzchni
komórki

-

Przeciwciało
dodawane na
krótko przed
pomiarem

Przykładowe markery

Przykładowe markery

powierzchniowe dla różnych

powierzchniowe dla różnych

populacji komórek układu

populacji komórek układu

odpornościowego

odpornościowego



Granulocyty i monocyty – CD4+



Limfocyty B – CD19+ lub CD20+



Limfocyty T – CD3+



Limfocyty Th – CD4+



Limfocyty Tc – CD8+



Limfocyty Treg – CD25+



Komórki NK – brak CD3+ , obecne CD16+ oraz
CD56+

Przeciwciała

Przeciwciała

monoklonalne

monoklonalne



Otrzymywane z jednego
klonu limfocytów B



Wykazują jednakową
swoistość wobec antygenu



Złożone z jednakowych
łańcuchów ciężkich i
lekkich



Powstające po fuzji
limfocytu B ze
szpiczakiem



Używane zarówno w
diagnostyce jak i terapii



Sprzężone z
fluorochromami

Analiza dwuwymiarowa

Analiza dwuwymiarowa

Tworzenie i analiza kolejnych

Tworzenie i analiza kolejnych

wykresów

wykresów

R1

Użyte fluorochromy:

-

FITC zielone CD4+

-

PE pomarańczowe

CD8+

-

PerCP czerwony CD3+

-

APC czerwony CD25+

Każdy barwnik ma

przydzielony dany

kanał

Kompensacja używana

przy nakładaniu się

spektrum emisji

Wielkość

Ziarnistość

Tworzenie i analiza kolejnych

Tworzenie i analiza kolejnych

wykresów

wykresów

R6

R7

R8

CD25
+

CD8+

R2

R3

R4

R5

CD8+

CD4+

Inne zastosowania cytometrii

Inne zastosowania cytometrii

przepływowej:

przepływowej:



Badanie cyklu

komórkowego



Badanie żywotności

komórek/ apoptozy



Mierzenie poziomu

wapnia



Mierzenie produkcji

cytokin



Badanie zawartości

DNA



Badanie potencjału

błony mt

Literatura:

Literatura:



probes.invitrogen.com



www.abdserotec.com



Wykłady z podstaw immunologii

Dziękujemy za

Dziękujemy za

uwagę

uwagę

.

.