WYKŁAD VI
•BUDOWA GENÓW
BUDOWA GENÓW
• Gen zawiera instrukcję dotyczącą
syntezy polipeptydu lub cząsteczki
strukturalnego RNA.
• W sensie fizycznym jest odcinkiem
DNA o określonej sekwencji
nukleotydów kodującym sekwencje
aminokwasów polipeptydu lub tylko
nukleotydów w RNA.
Wielkość genów jest różna i waha się
od 100pz do kilku milionów pz.
• U bakterii geny tworzą zespoły
(operony), a u Euc. większość jest
rozproszona lub tworzą tzw. rodziny
wielogenowe
• Rodziny wielogenowe nie podlegają
wspólnej regulacji,
• mogą być proste lub złożone.
Rodziny wielogenowe u Euc.
• Proste zawierają geny identyczne
• Wielogenowe
rodziny
złożone
składają się z genów podobnych
ale nie identycznych, jak np. geny
kodujące różne cząsteczki globin
różniące się między sobą tylko
pojedynczym aminokwasem.
• U E. informacja kodująca w genach
zapisana jest w segmentach sekwencji
nukleotydów zwanych eksonami, a
które są porozdzielane od siebie
sekwencjami niekodującymi –
intronami.
• Ekson zawiera sekwencje, które po
transkrypcji uczestniczą w translacji,
• w intronach sekwencje nie uczestniczą
w translacji, są wycinane po
transkrypcji z pre-mRNA.
Geny u Eucaryota
• większość genów ma budowę
nieciągłą,
• poza genemi histonów,
• genami białek szoku cieplnego
• i niektórych interferonów.
• Geny z intronami i egzonami nazywa
się mozaikowymi
• lub genami nieciągłymi.
• Obecnie przyjmuje się, że mozaikowa
organizacja genów była pierwotna,
• a ciągłe geny-bezintronowe są
zjawiskiem wtórnym.
geny u E. i są to tzw. geny podzielone, u P. – geny
ciągłe
• Poszczególne geny różnią się:
• długością – liczbą pz
• liczbą i długością intronów
• Liczba intronów w różnych genach
mieści się w granicach od 0 do ponad
50.
Najmniejszy gen u człowieka - z 1
eksonu liczącego 669pz
• koduje białko, które kieruje
różnicowaniem gonady pierwotnej w
kierunku jąder.
• w genie kodującym u nas dystrofinę
jest ich aż 78 i jest to nasz najdłuższy
gen (2,5mln pz koduje 3 685
aminokwasów i stanowi 0,6% dł.
całego genu).
Geny RNA
• Geny, które kodują cząsteczki
funkcjonalnego RNA (tRNA lub rRNA),
• również mogą zawierać introny,
• ale przerwy te występują zdecydowanie
rzadziej niż w genach kodujących mRNA.
• W wielu genach ilość DNA w
intronach przewyższa ilość DNA
eksonów,
• może go być dziesięć razy więcej,
• a w niektórych przypadkach nawet
ponad sto razy więcej.
• Specyficzna budowa ludzkich
genów sprawia, że dzięki
wykorzystaniu instrukcji
zapisanych w poszczególnych
eksonach w różny sposób te
same geny mogą kierować
produkcją różnych białek.
W skład genu wchodzą sekwencje
początkowe i końcowe genu,
• które ulegają transkrypcji, ale nie
podlegają
translacji,
w
tym
sekwencje promotorowe,
• Czyli sekwencje związane z procesem
inicjacji transkrypcji genu.
Na końcu 5’ i 3’ znajdują się sekwencje
• związane z rozpoczęciem obróbki
potranskrypcyjnej pre-mRNA
• Nazywa się je sekwencjami UTR
(Untranslations)
• Ekspresja
genu
jest
ściśle
regulowana
przez
sekwencje
położone
powyżej
sekwencji
kodującej i jest to:
• miejsce wiązania polimerazy RNA,
• miejsce
wiązania niezbędnych
czynników transkrypcyjnych
• oraz miejsce PROMOTORA czyli
inicjacji syntezy cząsteczki RNA.
Sekwencje promotorowe
• Sekwencje te mogą być b. liczne w
niektórych genach,
• dzieli się je na sekwencje promotora
podstawowego – położone w miejscu
składania kompleksu inicjacyjnego
• oraz
na
sekwencje
położone
powyżej
promotora
podstawowego.
Każda z trzech eukariotycznych polimeraz
RNA zależnych od DNA rozpoznaje różne
sekwencje promotorowe
• i to właśnie różnice pomiędzy
promotorami decydują o tym, która
polimeraza RNA zależna od DNA
przeprowadza transkrypcję których
genów.
• Każda polimeraza RNA wykorzystuje
promotor innego typu.
U kręgowców wyróżnia się trzy różniące się
strukturą typy promotorów:
• 1.Promotory rozpoznawane przez polimerazę
RNA I składają się z promotora
podstawowego,
który obejmuje miejsce startu transkrypcji
położonego między nukleotydami –45 a +20 -
sekwencje te warunkują zajście transkrypcji
oraz elementu kontrolnego UCE (Upstream
Control Element) znajdującego się +100 pz
powyżej miejsca startu (czyli przed miejscem
startu)
• Polim RNA I (RNA Pol I) transkrybuje
większość genów rRNA, znajduje się w
jąderku.
2. Promotory rozpoznawane przez
polimerazę RNA II
• są b. różne i znajdują się w odległości do kilku
tys. pz powyżej miejsca startu transkrypcji.
• Promotor podstawowy składa się z dwóch
segmentów:
• z bloku –25 zwanego sekwencją TATA lub kasetą
TATA i z sekwencji inicjatorowej – Inr
• Do pełnej aktywności promotora niezbędne są
inne sekwencje występujące w rejonie od -40 do
-110.
• W 56% genów są sekwencje bogate w pary CG
powtarzane
wielokrotnie
i
są
nazywane
wysepkami CpG, są ważnym elementem w
inicjacji transkrypcji.
• Sekwencje CCAAAT w odległości 70-90pz
od miejsca inicjacji transkrypcji położone
przed blokiem TATA są również ważne w
transkrypcji, są miejscem wiązania
innych czynników transkrypcyjnych.
• Polim RNA II (RNA Pol II)
transkrybuje wszystkie geny
kodujące białka i niektóre geny
małych jądrowych RNA (snRNA-
small nuclear RNA), znajduje się w
nukleoplaźmie
Obszar promotorowy genu znajduje się na
jego 5' końcu i zawiera kilka istotnych
rejonów rozpoznawanych przez polimerazę
RNA oraz czynniki transkrypcyjne
• najbardziej powszechnym jest kaseta
TATA ( tzw. TATA-box ).
• Jest to 7-nukleotydowa sekwencja
położona w odległości ok. 25 p.z. od
miejsca startu transkrypcji, która w
pełni prezentuje się następująco: 5'-
TATAAAA -3'.
• Obecność kasety TATA, choć niezbędna w
przypadku prawie wszystkich genów; nie
jest wystarczająca, aby z promotora
ruszyła transkrypcja. Kaseta TATA stanowi
tzw. część rdzeniową promotora.
• W 56% genów są sekwencje bogate w
pary CG powtarzane wielokrotnie i są
nazywane wysepkami CpG, są ważnym
elementem w inicjacji transkrypcji.
Rejony rozpoznawane przez
polimerazę II RNA
• 3. Promotory dla polimerazy RNA III
są nietypowe, gdyż znajdują się
wewnątrz genów i znacznie się różnią.
• Ich element podstawowy to sekwencja
licząca od 50 do 100pz podzielone na
dwa bloki.
• Polim III (RNA Pol III) transkrybuje
geny tRNA, 5S rRNA, kilka snRNA,
znajduje się w nukleoplaźmie
Wiele genów zawiera dodatkowe
sekwencje
• Są one położone w różnych odległościach od
genów, ale mimo nawet znacznej odległości
gen pozostaje zawsze pod ich kontrolą i są to:
• sekwencje
wzmacniające
ehnacerowe,
które znacznie stymulują transkrypcję i
znajdują się poza miejscem promotorowym,
• wyciszające silencerowe, które hamują
transkrypcję.
• Sekwencje terminacji – takie znaczenie
mają sewkencje palindromowe
Enhancery
• enhancery tkankowo-specyficzne
wzmagające transkrypcję tylko tam, gdzie
obecne są białka wiążące się w ich obrębie
• tylko w niektórych komórkach wykazują
aktywność wzmacniającą
• Możliwość oddziaływań enhancer :
promotor mimo odległości pomiędzy nimi
wynoszącej niekiedy kilka tys. p.z. istnieje
dzięki dużej elastyczności nici DNA. Owa
elastyczność objawia się zdolnością DNA do
dowolnego wyginania się.
• Interakcje enhancer : promotor
Silencery - (ang. silence -
cisza ),
•
sekwencje służące wyciszeniu aktywności
promotora; podobnie jak enhancery mogą być w
różnym stopniu oddalone od genu w obu
kierunkach, a także występować w jego wnętrzu.
•
Np. w genach kodujących immunoglobuliny
(białka syntetyzowane jedynie w limfocytach B)
silencer wbudowany jest w obrębie enhancera,
jego znaczenie uwidocznia się w komórkach
innych niż limfocyty B. Jest to swoiste
zabezpieczenie przed ekspresją genów
immunoglobulin związane z inaktywacją
enhancera.
BUDOWA GENÓW
Struktura genu
prokariotycznego
• Promotor (przed miejscem inicjacji
transkrypcji) zawiera dwie ramki:
• +10 (AT)
• +35 (TTGACA)
• Obie ramki są miejscami wiązania
polimerazy RNA zależnej od DNA.
Struktura genu
prokariotycznego
Cistron
• jednostka spełniająca funkcję
biochemiczną,
• której ekspresja prowadzi do
powstania pojedynczego łańcucha
polipeptydowego
• składa się z kilku tysięcy par
nukleotydów, może zostać
podzielony na mniejsze części.