Rośliny transgeniczne


Rośliny transgeniczne

Poniższe informacje zostały mi udostępnione dzięki uprzejmości pana dr-a Romana Śniadego z Akademii Rolniczej we Wrocławiu

 

 

Transformowanie roślin

Transformacja genetyczna - proces przenoszenia obcych fragmentów DNA (genów) do genomu biorcy i stabilną ich integrację z tym genomem. Wprowadzony fragment DNA ulega ekspresji w genomie gospodarza, przez co możemy uzyskać rośliny o nowych lub ulepszonych cechach.

Rośliny transgeniczne - rośliny uzyskane za pomocą transformacji genetycznej.

 

Rośliny uprawne, u których zastosowano technikę transformacji

 

 

Etapy uzyskiwania roślin transgenicznych:

    1. Wyizolowanie i sklonowanie glonu przeznaczonego do transformacji,

    2. Opracowanie metody wprowadzenia genu do komórek roślinnych,

    3. Ustalenie metodyki regeneracji transformowanych komórek w kompletnie wykształcone rośliny,

    4. Określenie sposobu sprawdzenia integracji i ekspresji wprowadzonego genu,

    5. Zbadanie stabilności transformowanego genu w następnych pokoleniach roślin i określenie sposobu dziedziczenia nabytej cechy.

 

 

 

Geny używane w transformacji roślin

Do transformacji używa się

konstruktów obejmujących gen, który chcemy wprowadzić połączony z

genem markerowym (selekcyjnym) i reporterowym (wizualizującym).

Konstrukt = odcinek DNA, plazmidu czy plazmidu w formie linearnej

odpowiednio przygotowany:

gen struturalny + sekwencje regulacyjne: promotor i terminator (niezbędne do funkcjonowania genu)

Promotor - poprzedza gen strukturalny i jest odpowiedzialny za inicjację transkrypcji, a terminator za jej ukończenie.

 

Promotory stosowane w transformacji

Promotory konstytutywne

Pochodzenie

nos

syntaza nopaliny

ocs

syntaza oktopiny

man

syntaz mannopiny

CaMV 19S, 35S

wirus mozaiki kalafiora

Geny markerowe

Gen

Kodowany enzym

Pochodzenie

Oporność

Antybiotyki

npt II

fosfotransferaza neomycyny

Tn 5

neomycyna,

kanamycyna

hpt aph IV

fosfotransferaza

hygromycyny

Escherichia coli

hygromycyna

CAT

acetylotransferaza

chloramfenikolu

Tn 9

chloramfenikol

Herbicydy

Bar

acetylotransferaza

fosfinotrycyny

Streptomyces

hygroscopicus

fosfinotrycyny

aro A

syntaza 5-endopiro - gronoszikimo-3-fosforanowa

Salmonella

typhimurium

glifosat

Geny markerowe pozwalają wyselekcjonować transformowane komórki. Geny te warunkują oporność na antybiotyki i herbicydy. Komórki zawierające geny markerowe przeżywają na pożywkach selekcyjnych (zawierają geny zdolne do wytworzenia enzymów inaktywujących dodane do pożywki antybiotyki czy herbicydy.

Geny reporterowe

Gen

Kodowany enzym

Pochodzenie

CAT

acetylotransferaza chloramfenikolu

Tn 9

GUS

β - glukuronidaza

Escherichia coli

luc

lucyferaza

Photinus pyralis

bar

acetylotransferaza

fosfinotrycyny

Streptomyces

hygroscopicus

β - gal

β - galaktozydaza

Escherichia coli

 

Geny reporterowe umożliwiają dość wczesne wykrycie transformowanych komórek.

Ekspresja genów reporterowych (wykrywna przez metody histochemiczne, spektrofotometryczne oraz fluorymetryczne) świadczy o włączeniu i funkcjonowaniu wprowadzonych genów w genomie rośliny.

Metody transformacji

Proces transformacji odbywa się w warunkach in vitro, a DNA jest wprowadzane do pojedynczych komórek (protoplastów) lub do eksplantatów pochodzących z różnych części roślin.

1.Metody wektorowe

2. Metody bezwektorowe