KATEDRA BIOTECHNOLOGII I BIOLOGII MOLEKULARNEJ

PRACOWNIA MIKROBIOLOGII OGÓLNEJ

METODY BEZPOŚREDNIE OZNACZANIA OGÓLNEJ LICZBY MIKROORGANIZMÓW

Biotechnologia II

Grupa: 4

Termin zajęć: poniedziałek 15¹⁵-17³⁰

Prowadząca: dr K. Grata

1. Cel ćwiczenia

Oznaczenie liczby komórek drożdży piekarskich Saccharomyces cerevisiae za pomocą metod bezpośrednich - w komorze Thoma i komorze Burkkera.

2. Odczynniki, materiały i sprzęt badawczy

Komora Thoma, komora Burkkera, pipety, probówki laboratoryjne, mikroskop optyczny, szkiełka nakrywkowe, zawiesina drożdży piekarskich Saccharomyces cerevisiae.

3. Wykonanie ćwiczenia oraz obliczenia

Komora Thoma

Za pomocą metody 10-krotnych rozcieńczeń Kocha przygotowano zawiesinę drożdży piekarskich o rozcieńczeniu 10^-2. Po ustawieniu oświetlenia pod mikroskopem znaleziono siatkę komory przy powiększeniu 10x. Otrzymaną zawiesinę drożdży piekarskich dobrze wymieszano przy pomocy pipety, następnie kilka kropel naniesiono na komorę Thoma, przykryto szkiełkiem nakrywkowym. Zliczano liczbę komórek w poszczególnych kwadratach siatki komory Thoma. Obliczono średnią liczbę komórek w kwadracie dużym według wzoru:

gdzie:

a - średnia liczba komórek w kwadracie dużym

i - liczba małych kwadratów w kwadracie dużym

j - liczba dużych kwadratów, w których obliczono liczbę komórek

Wyniki podstawiono do wzoru:

[jtk/cm3]

gdzie:

a - średnia liczba komórek w kwadracie dużym

n - rozcieńczenie

Obliczenia:

I 3/16

II 1/16

III 2/16

IV 1/16

V 1/16

VI 1/16

VII 1/16

VIII 3/16

IX 0/16

X 1/16

[jtk/cm3]

Komora Burkkera

Podobnie jak przy komorze Thoma przygotowaną zawiesinę drożdży naniesiono na komorę Burkkera i przykryto szkiełkiem nakrywkowym. Obliczono średnią liczbę komórek w kwadratach A i B według wzoru:

gdzie:

j - liczba kwadratów, w których obliczano liczbę komórek

Wyniki podstawiono do wzorów:

[jtk/cm3]

[jtk/cm3]

Obliczenia:

I A: 0,0,0,0,0,1,0,0,0 1/9

B: 0,0,1,0,0,2,1,0,0,0,0,1,3,0,0,0 8/16

II A: 0,0,0,0,0,1,0,0,1 2/9

B: 2,2,1,2,2,1,0,6,0,0,3,3,0,1,2,0 25/16

III A: 0,0,0,0,1,0,1,0,0 2/9

B: 0,0,0,1,2,1,1,0,1,2,0,1,1,0,0,0 10/16

IV A: 0,0,0,0,0,0,0,0,0 0/9

B: 3,1,3,0,0,0,2,0,1,0,0,1,1,0,0,1 13/16

V A: 0,0,0,0,0,0,1,0,0 1/9

B: 1,1,0,1,0,0,2,0,0,0,2,0,0,0,0,1 8/16

VI A: 0,0,0,0,0,0,0,0,0 0/9

B: 2,3,2,1,1,1,0,0,2,1,1,2,0,2,0,0 18/16

[jtk/cm3]

[jtk/cm3]

4. Wyniki

Liczba komórek drożdży piekarskich w 1 cm³ badanej zawiesiny:

- komora Thoma: X=
[jtk/cm3]

- komora Burkkera: X_A
[jtk/cm3]

[jtk/cm3]

5. Wnioski

Obie metody liczenia są porównywalne, ponieważ wyniki obliczeń są tego samego rzędu wielkości.

1

---