1. Reakcja Millona służy do wykrywania białek

2. Antygen jest to substancja(zazwyczaj białko proste lub złożone, rzadziej związek o niższej masie cząsteczkowej) wykazująca zdolność do wywołania produkcji swoistych przeciwciał przez system immunologiczny oraz swoistego wiązania wytworzonych przeciwciał i tworzenia z nimi kompleksów.

3. W metodzie hybrydyzacji in situ wykorzystuje się sondy, które wprowadzane są do środowiska reakcji.

4. Pożywki stosowane do hodowli zapewniają sterylne środowisko wzrostu oraz dostarczają komórkom niezbędnych związków odżywczych – węglowodany, aminokwasy, białka i peptydy, kw. tłuszczowe, cholesterol, lipidy, witaminy, sole mineralne.

5. Środki kontrastujące w technice mikroskopii elektronowej transmisyjnej to sole metali ciężkich zawierające atomy o wysokiej masie.

6. Do laboratorium dostarczono próbki z prośbą o stwierdzenie w nich obecności (...) mikroskopie świetlnym. Przygotuj metodykę barwienie immunocytochemicznego.

1. Reakcja PAS jest używana w celu lokalizacji cukrowców w komórce.

2. Przeciwciała poliklonalne – przeciwciała, które wiążą różne antygeny i wykazują różne powinowactwowzględem tego samego antygenu.

3. Wykrywanie obcego materiału genetycznego w komórce umożliwia metoda hybrydyzacji in situ.

4. Komórki do hodowli jednowarstwowej izoluje się poprzez trawienie enzymatyczne(jednostopniowe – trypsyną lub kolagenazą I hialuronidazą lub dwustopniowe - kolagenazą, a następnie trypsyną)

5. Nośnik to ten składnik utrwalacza I, który zapewnia stałe I optymalne pH(7,2-7,4), ciśnienie osmotyczne i skład jonowy. Najczęściej stosowane nośniki bufor fosforanowy i bufor kakodylowy.

6. Musisz wykonać badania komórek wątroby w warunkach in vitro - opisz przygotowania hodowli jednowarstwowej hepatocytów

1. Produkt reakcji cytochemicznej musi być widoczny(barwny, fluoryzujący lub elektronowo gęsty) i nierozpuszczalny(co zapobiega jego wypłukaniu i zatarciu pierwotnej lokalizacji) w środowisku reakcji.

2. Przeciwciało – białko – immunoglobulina wytwarzana przez limfocyty B, wiążąca się z antygenem, ma kształt litery Y i składa się z dwóch ciężkich i dwóch lekkich łańcuchów polipeptydowych. Pod wpływem trawienia papainą rozpada się na fragment Fc oraz dwa fragment Fab, które zawierają miejsca wiążące antygen.

3. Na jakiej zasadzie opiera się hybrydyzacja in situ. Hybrydyzacja in situ wykorzystuje właściwość wiązania się komplementarnych łańcuchów kwasów nukleinowych poprzez wybiórcze tworzenie się par przez zasady purynowe i pirymidowe.

Badane sekwencje nukleotydów wykrywa się za pomocą specjalnie przygotowanych komplementarnych odcinków DNA lub RNA, które nosza nazwe sond, dodatkowo znakowanych, by można było dostrzec miejsce ich związania w komórce.

4. Hodowla tkanek pozwala na badanie żywych komórek pozbawionych kontrolnego i regulacyjnego wpływu na organizm.

5. Utrwalacz w utrwalaniu I składa się z nośnika(bufor fosforanowy, bufor kakodylowy) oraz sybstancji utrwalających(paraformaldehyd, aldehyd glutarowy).

6. Dostałeś wycinek wątroby, który masz zbadać w mikroskopie świetlnym i wykryć glikogen. Przedstaw metodykę.

1. Jaką metodą wykrywa się enzymy w cytochemii. Techniką mrożeniową.

2. Przeciwciało monoklonalne to zbiór przeciwciał, które wykazują jednakową swoistość względem danego antygenu oraz takie same powinowactwo(najlepsze do badań).

3. Hodowla komórek w inkubatorze przebiega w atmosferze nawilżonego powietrza o temp. 37-38 st. C w przypadku komórek ssaków i 38-40 st. C w przypadku komórek ptaków oraz dodatkiem 95% tlenu i 5% dwutlenku węgla.

4. Jakich utrwalaczy używa się w I utrwalaniu podczas obróbki materiału do TEM? Mieszanina: Paraformaldehyd(1%), aldehyd glutarowy(2,5%), bufor fosforanowy(0,1M o pH 7,4).

5. W hybrydyzacji in situ znakuje się sondy za pomocą izotopów promieniotwórczych(3H, 32P, 35S), biotyny i znacznika antygenowego.

6. trzeba było napisać etapy autoradiografii, aby wykryć jak działa szlak metaboliczny związku, którego nazwy nie pamiętam (ale to akurat nie jest istotne)

1.Audioradiografia polega na lokalizacji substancji znakowanych izotopami w komórkach i tkankach(np. radioaktywnych sond w hybrydyzacji in situ).

Substancje te wprowadza się doświadczalnie do żywego organizmu lub żywych komórek(w hodowli), gdzie gromadzone są lub wbudowane do znanego związku w organizmie i włączane w procesy metaboliczne(np. tymidyna znakowana trytem wbudowuje się do DNA komórek).

2.Wykrywanie enzymów polega na uwidocznieniu produktów ich aktywności(wykrywany enzym musi być czynny; do środowiska wprowadzamy substrat, który pod wpływem funkcji wykrywanego enzymu ulega przemianie w barwny lub elektronowo gęsty strąt).

3. Czym sie znakuje przeciwciała?

- fluorochroami(gdy ogląda się w mikroskopie fluorescencyjnym),

- enzymami(peroksydaza, fosfataza zasadowa) – zarówno do MŚ i ME,

- metalami – ferrytyną(białko zawierające żelazo) i złotem – tylko do badania w ME.

4. Rodzaje hodowli komórek:

- hodowla jednowarstwowa komórek(w płaskim naczyniu),

- hodowla komórek w zawiesinie,

- hodowla komórek w postaci agregatów,

- hodowla narządowa statyczna,

- hodowla narządowa przepływowa.

5. Coś z czterotlenkiem osmu trzeba było wpisać – Utrwalanie II – wtórne w przygotowaniu materiału do badań w mikroskopie elektronowym, transmisyjnym TEM: 1,2% roztwór czterotlenku osmu w wodzie destylowanej lub buforze fosforanowym).

6.Do laboratorium dostarczono probki wykryc enzym trzeba bylo za pomoca transmisyjnego elektronowego w podpunktach opisac

1. W metodach cytochemicznych szukana substancja zawarta w materiale biologicznym reaguje z substratem – wprowadzonym do środowiska reakcji cytochemicznej związkiem chemicznym.

W miejscu wykrywanej substancji powstaje product reakcji cytochemicznej, którego lokalizacja i ilość jest oceniana w MŚ lub ME.

2. Rodzaje reakcji immunochemicznych:

- reakcje bezpośrednie – dodaje się znakowane przeciwciało bez[ośrednio przeciwko szukanemu antygenowi.

- reakcje pośrednie – bardziej swoiste, w I etapie przeprowadza się reakcję antygenu z nieoznakowanym przeciwciałem, a w II etapie stosuje się znakowane antyprzeciwciała(przeciwciało przeciw przeciwciału).

- rekacja awidyna – biotyna(metoda ABC).

3. Surowice dostarczają komórkom/tkankom w hodowli hormonów, czynników wzrostu i różnicowania komórek pobudzających wzrost, intensyfikują różnicowanie.

4. Trawienie enzymatyczne tkanek odbywa się za pomocą enzymów(jednostopniowe - trypsyną lub kolagenazą i hialuronidazą lub dwustopniowe – kolagenazą a następnie trypsyną) i służy do izolacji komórek z wycinków lub całych narządów.

5. Obraz w TEM jest zawsze czarno-biały.

6. Trzeba było wykryć enzym MOS w komórkach szyszynki w MŚ, napisać jaką metodę się wybrało i dlaczego. Przedstawić metodykę.