LabINFO.pl — użyteczne informacje w Twoim laboratorium Izolacja genomowego DNA z krwi Materiały:



500 mM EDTA; pH = 8,0



Cytrynian sodu



0,2 M octan sodu; pH = 5,6



10% SDS



5 M NaCl



Etanol absolutny , etanol 70%

Wykonanie:

1.

Pobrać 1 ml krwi do 100 µl EDTA.

2.

Dodać 7 ml 1% cytrynianu sodu. Wirować 10 min, 2500 rpm. Odrzucić supernatant. Osad zawiesić w 5 ml H2O.

3.

Dodać1 ml 5% cytrynianu sodu. Wirować 10 min, 2500 rpm. Odrzucić supernatant.

4.

Rozpuścić osad w 1 ml octanu sodu. Dodać 0,1 ml 10% SDS. Inkubować 1 h, 37OC.

5.

Dodać 0,4 ml NaCl i wymieszać . Wirować 10 min, 5000 rpm, 4OC. Supernatant przenieść do świeżej probówki. Powtarzać aż supernatant będzie klarowny.

6.

Dodać 2,5 obj. etanolu absolutnego. Wymieszać i zebrać DNA do świeżych probówek.

7.

Zwirować w 4OC, 13000 rpm. Przemyć DNA 70% etanolem. Zwirować ponow-nie i odrzucić supernatant.

8.

Osad wysuszyć w temp. pokojowej ok. 10 min.

9.

Rozpuścić uzyskane DNA w 100 µl sterylnej H2O.

Str. 1 z 1