initAd();



































  Biochemia
  Biotechnologia
  Fizjologia
  Genetyka
  Medycyna
  Mikrobiologia
  Inne








   Biologii komórki
   Biologii molekularnej
   Medycyny molekularnej
   Histologii
   Botaniki
  
Leksykon medyczny
   Testy








   Botanika
   Budowa komórki
   Ewolucja
   Genetyka
   Medycyna
   Terminologia
   Zoologia








   A 
   B 
   C 
   D 
   E 
   F 
   G
   H 
   I 
   J 
   K 
   L 
   Ł 
   M
   N 
   O 
   P 
   R 
   S 
   Ś 
   T
   U 
   W 
   Z 
   Ż 
  Cała lista 








   Apoptoza
   PDB
   Biochemia
   Biotechnologia
   Czasopisma
   Książki
   Uczelnie
   Uniwersytety
   Zdjęcia

















 O nas
           Tu jesteś:  
Biologia.pl < Forum - Genetyka













Informacje o plazmidzie E. Coli pBR322

Aleksandra Wewiórska, 17 maja 2000:


Szukam wszelkich możliwych informacji (miejsca restrykcyjne, klonowanie itp.) na temat plazmidu E. Coli pBR322.

Natalia Rybkowska, 23 maja 2000:




Plazmid pBR 322 jest wektorem bakteryjnym, czyli cząsteczką DNA mającą zdolność
niezależnej od chromosomów replikacji w danym typie
komórki, a równocześnie przenoszenia fragmentów obcego DNA "z
zapewnieniem" - ich powielenia w tych komórkach i najczęściej wydatnej
ekspresji zawartych w nich genów. Składa się z 4362 par
nukleotydów.
Jego zasadniczymi komponentami są:
sekwencja ori (origin) - ponieważ pochodzi ona z
naturalnie występującego plazmidu Col E1, zapewnia inicjację replikacji
pBR 322 tylko w komorkach E. Coli,
oraz 2 geny markerowe:
amp\' warunkujący oporność na ampicylinę,
tet\' warunkujący oporność na tetracyklinę .

Jeżeli chodzi o miejsca restrykcyjne tego plazmidu jest ich dużo - bardzo ładna mapa restrykcyjna jest np. na str 165 "Genetyki molekularnej" Piotra Węgleńskiego ( PWN, Warszawa 1996 ).
Ograniczając się tylko do niektórych spośród "pojedynczych" - tzn. "utworzonych" przez restryktazy tnące pBR 322 tylko w jednym miejscu:
dla restryktazy EcoR I - takie miejsce znajduje się "na poziomie" 4284 nukleotydu,
dla Cla I - 23-go, dla BamH I - 375, dla Sal I - 651, dla Pst I - 3607...

Natomiast zastosowanie pBR 322 wygląda następująco:
- przecięcie tego plazmidu w jednym z miejsc restrykcyjnych, przez odpowiednią
restryktazę, umożliwia włączenie do niego fragmentu DNA. Odbywa się to przy udziale ligazy DNA mogącej połączyć ze sobą, za pomocą wiązań fosfodiestrowych, dowolne cząsteczki DNA.

- wprowadzenie (na drodze transformacji) tak zrekombinowanego wektora do komorek E. Coli wrażliwych na tetracyklinę i
ampicylinę, umożliwia ekspresję w nich genów, zawartych w
"dołączonym" do wektora DNA.

Znajomość genu "plazmidowego", który przecina dana restryktaza umożliwia bardzo szybką identyfikację komórki do
której "trafił" zrekombinowany plazmid. Przecięcie genu przez restryktazę
powoduje bowiem jego unieczynnienie i brak "zapewnianej" przez
niego cechy.
Jeżeli zatem np. komórki zawierają zrekombinowany plazmid,
który powstał w wyniku działania restryktazy uszkadzającej gen oporności na
ampicylinę to będą one wrażliwe na ten
lek, a jednocześnie oporne na tetracyklinę.
pBR 322 został użyty m.in. do klonowania DNA
somatotropiny.



pBR322 "ma swoją angielską stronę" pod adresem: http://www.engr.umd.edu/~nsw/ench482/pbr322.htm




Powrót na listę














CZWARTEK13 września 2001



Sponsor serwisu:











Jak szukać?
 
Znajdź






Zobacz także:




Leksykon medyczny



Kurs histologii






Wiedza i Życie 





Świat Nauki 





dlaczego.pl 





gimnazjum.pl 





liceum.pl 






mapaPolski.pl 






pilot.pl 
















Serwis nominowany do 'Złotej witryny' konkursu Webfestival 2001.

standard HTML 4.0Copyright © 1996 - 2001Prószyński i S-ka SAemail: [e-mail]