BARWIENIE HEMATOKSYLINĄ I EOZYNĄ

Barwienie topograficzne H-E ma na celu obserwację wzajemnego stosunku położenia ,wielkości, kształtu i barwliwości jądra w stosunku do cytoplazmy. W przypadku narządów pozwala na obserwację układu tkanek (różnych warstw komórek )budujących narząd.

W przypadku wycinków zatopionych w parafinie barwienie składa się z kilku etapów: odparafinowanie, nawodnienie, właściwe barwienie, odwodnienie, prześwietlenie, zamknięcie w balsamie kanadyjskim

Odparafinowanie Nawodnienie Barwienie

Prześwietlenie Odwodnienie w alk. 70%-90% 10-15''

Zamknięcie w balsamie kanadyjskim

Najpierw barwi się jądra hematoksyliną, a następnie eozyną cytoplazmę. Czas barwienia w hematoksylinie ustala się laboratoryjnie. Za właściwy uważamy ten, który spełnia niżej wymienione efekty barwienia.

HEMATOKSYLINA jest barwnikiem naturalnym pochodzenia roślinnego o oddziaływaniu zasadowym, ma więc powinowactwo do struktur jądra o charakterze kwaśnym i barwi je na fioletowo.

EOZYNA to barwnik syntetyczny stosowany w r-r ze 1% wodnym lub alkoholowym. Ma powinowactwo do kwaśnych struktur cytoplazmy i składników pozakomórkowych- włókien łącznotkankowych. Barwi je na kolor różowo-czerwony w różnych odcieniach.

UWAGA! Należy pamiętać, by po wyjęciu preparatu z eozyny i opłukaniu nadmiaru barwnika w wodzie dest.należy bardzo szybko przeprowadzić go przez niskie stężenia alkoholu( tj. od 70 %-90 % włącznie), ponieważ w tych stężeniach eozyna łatwo wypłukuje się. W przypadku przebarwienia hematoksyliną można różnicować w 0,5 % CH₂COOH lub 1 % HCL wodnym lub alkoholowym.

Wynik barwienia:

Jądra - fioletowe z wyraźnie widoczną chromatyną i jąderkami

Cytoplazma - różowa w różnych odcieniach

Mięśnie - różowo-czerwone

Erytrocyty - pomarańczowe, Tkanka łączna - różowa

Uwagi do metody barwienia H i E

Czas barwienia w hematoksylinie zależy od siły barwiącej barwnika i dlatego przed ustawieniem metody należy laboratoryjnie ustalić czas barwienia. W tym celu barwimy 3 preparaty: pierwszy - 3 min.; drugi - 5 min.; trzeci - 7 min. Po zabarwieniu obserwujemy pod mikroskopem efekty barwienia. Metodę ustawiamy na ten czas, w którym zawartość jądra jest jądra jest wyraźnie widoczna(chromatyna, jąderka, błona jądrowa).

TECHNIKI HISTOLOGICZNE Ćwiczenie nr 3

H₂O B

10'

HEM

3-7 `

H₂O D

1'

70%

1'

80%

1'

90%

1'

96%

3'

100%

3'

100%

3'

KSY

II

3'

EOZ

10'

KSY

I

3'

3 ^`

3

---